hsa-miR-199a-5p、ITGA3和VEGF在稽留流产绒毛组织中表达的研究

发布时间：2020-11-14 10:57

　　 第一部分:预测ITGA3是hsa-miR-199a-5p的可能靶基因及ITGA3和VEGF相互作用目的:利用生物信息学预测软件寻找hsa-miR-199a-5p与ITGA3基因是否存在靶向关系,ITGA3是否为hsa-miR-199a-5p的靶基因;查阅相关文献,明确hsa-miR-199a-5p和ITGA3之间是否存在靶向调控关系,利用蛋白相互作用软件对ITGA3与VEGF之间相互作用关系进行预测。方法:1、应用miRbase获取hsa-miR-199a-5p的碱基序列;2、使用Target Scan、miRDB、miRTarBase和microRNA.org等在线软件寻找hsa-miR-199a-5p与ITGA3基因的靶向关系;3、查阅国内外数据库关于hsa-miR-199a-5p和ITGA3的相关文献;4、寻找是否有研究验证hsa-miR-199a-5p和ITGA3之间存在调控关系;5、应用STRING蛋白作用软件预测ITGA3和VEGF之间的作用关系。结果:1、TargetScan、miRDB、miRTarBase和microRNA.org四个在线预测软件均找到的ITGA3是hsa-miR-199a-5p一个靶基因,2、国外关于膀胱癌和头颈部鳞状细胞癌的研究中报道了hsa-miR-199a-5p与ITGA3存在靶向关系,hsa-miR-199a-5p调控ITGA3的表达;3、STRING软件预测到ITGA3和VEGF之间存在相互作用。结论:1.hsa-miR-199a-5p和ITGA3之间存在靶向关系,hsa-miR-199a-5p调控ITGA3的表达。2.ITGA3和VEGF之间有相互作用关系。第二部分:孕早期稽留流产者绒毛组织中hsa-mi R-199a-5p及ITGA3、VEGF表达变化的研究目的:本研究旨在检测孕早期稽留流产患者绒毛组织中hsa-mi R-199a-5p及ITGA3、VEGF表达变化,并分析三者之间关系,探讨其在稽留流产发生机制中的意义,为预防和治疗孕早期稽留流产提供理论基础。方法:1、收集2017年11月-2018年2月在广西医科大学第一附属医院计划生育科门诊就诊的行人工流产的患者66例,其中稽留流产并行人工流产患者35例(稽留流产组),正常早孕要求行人工流产的患者31例(正常早孕组);2、采用实时荧光定量PCR法检测绒毛组织中的hsa-mi R-199a-5p和ITGA3、VEGFm RNA的表达;3、采用苏木素-伊红(HE)染色观察胎盘绒毛组织的形态结构;4、采用免疫组化SP法检测各组绒毛组织中ITGA3蛋白、VEGF蛋白的表达情况,采用CD34标记绒毛组织内皮细胞,并检测两组绒毛组织的微血管密度(MVD)值;5、分析ITGA3、VEGF的表达与MVD之间的相关性;6、统计学方法采用SPSS19.0统计软件,计量资料以x±s表示,行t检验,变量之间相关性行spearman相关分析。P0.05为差异有统计学意义。结果1.q RT-PCR检测结果及相关性1.1 hsa-mi R-199a-5p在稽留流产组绒毛组织中相对表达量为1.99±0.29,正常早孕组为1.07±0.16,稽留流产组绒毛组织中hsa-mi R-199a-5p表达量高于正常早孕组,差异具有显著性(PO.05);1.2 ITGA3 m RNA在稽留流产组患者绒毛组织中相对表达量为1.69±0.27,正常早孕组为2.61±0.36,稽留流产组绒毛组织中ITGA3 m RNA表达量低于正常早孕组,差异具有显著性(PO.05);1.3 VEGF m RNA在稽留流产组患者绒毛组织中相对表达量为1.77±0.15,正常早孕组中为2.48±0.19,稽留流产组绒毛组织中VEGF m RNA表达量低于正常早孕组,差异具有显著性(PO.05)。2.HE染色结果2.1正常早孕组:胎盘绒毛形态规则,大小一致,外层合体滋养细胞和内层细胞滋养细胞细胞之间彼此互相嵌紧呈砖砌状,排列整齐,胞质丰富,并且边界清晰,绒毛间质无水肿样改变,其中绒毛间质中可见微血管,数量较丰富,内皮细胞较厚,并且管腔内充满血细胞,呈扩张充血;2.2稽留流产组:胎盘绒毛形态欠规则,外层的合体滋养层细胞数量减少,甚至断裂消失,细胞萎缩变小并融合一起,内层的细胞滋养细胞可见异常增生,细胞数量增多,细胞间排列混乱,绒毛间质可见轻微水肿或者水肿,间充质细胞可见纤维素样变性,绒毛内的小血管发育不良,微血管数量减少,并且血管腔形态不规则或者无明显管腔形态,管腔内红细胞的数量减少,有时可见少量炎症细胞。3.免疫组化SP检测结果及相关性3.1 ITGA3蛋白主要表达于胞膜和胞浆中,稽留流产组绒毛组织中ITGA3蛋白表达量为0.23±0.04,正常早孕组为0.16±0.02,稽留流产组绒毛组织中ITGA3蛋白表达水平低于正常早孕组,差异有统计学意义,P0.05。3.2 VEGF蛋白主要分布于细胞质或细胞膜上,稽留流产组绒毛组织中VEGF蛋白表达量为0.34±0.03,正常早孕组为0.45±0.03,稽留流产组绒毛组织中VEGF蛋白表达水平低于正常早孕组,差异有统计学意义,P0.05。3.3 CD34主要阳性表达于绒毛组织的血管内皮细胞上。稽留流产组绒毛组织的MVD值为(20.5±6.4)个/HP,正常早孕组绒毛组织的MVD值为(32.4±5.6)个/HP,稽留流产组中MVD值明显低于正常早孕组的MVD值,两组间差异具有统计学意义,P0.05。3.4对免疫组化SP结果进行Spearman相关分析显示:在稽留流产患者绒毛组织中,ITGA3蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关(r为0.456,P0.006),ITGA3蛋白表达与MVD值呈正相关(r=0.524,P0.001),VEGF蛋白表达与MVD值呈正相关(r=0.615,P0.000)。结论:1、稽留流产组绒毛组织中hsa-mi R-199a-5p的表达高于正常早孕组,稽留流产组绒毛组织中ITGA3 m RNA的表达低于正常早孕组,稽留流产组绒毛组织中VEGFm RNA的表达低于正常早孕组;2、稽留流产组绒毛组织中ITGA3蛋白的表达低于正常早孕组,稽留流产组绒毛组织中VEGF蛋白的表达低于正常早孕组,稽留流产组绒毛组织中的MVD值低于正常早孕组的MVD值;3、在稽留流产组绒毛组织中,ITGA3蛋白与VEGF蛋白表达呈正相关,ITGA3蛋白表达与MVD值呈正相关,VEGF蛋白表达与MVD值呈正相关,ITGA3、VEGF低表达与稽留流产的绒毛血管的形成障碍有关。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R714.21
【部分图文】：

图 1 miRBase 软件所示 hsa-miR-199a-5p 序列Fig 1 hsa-miR-199a-5p sequence shown by miRBase softwarbank 获得 ITGA3 基因序列及详细信息，ITGA3 位图 2-3。图 2 ITGA3 基因序列Fig 2 ITGA3 gene sequence

见图 1。图 1 miRBase 软件所示 hsa-miR-199a-5p 序列Fig 1 hsa-miR-199a-5p sequence shown by miRBase software使用 Genbank 获得 ITGA3 基因序列及详细信息，ITGA3 位于 17 染q21.33，见图 2-3。

图 3 ITGA3 基因详细信息Fig 3 The detailed information of ITGA3 gene用 Targetscan 软件预测到 ITGA3 为 hsa-miR-199a-5p 的靶基因arget Scan（版本 7.2）软件预测到 hsa-miR-199a-5p 和 ITGA3发现 hsa-miR-199a-5p 与 ITGA3 的 3'端 UTR 的 395-402 位且 ITGA3 的结合序列是 5'-ACACUGGA-3（'图 ）与 hsa-miR-分序列一致，由此说明 hsa-miR-199a-5p 能够调控 ITGA3，两关系。图 4 Target Scan 软件预测的 hsa-miR-199a-5p 和 ITGA3 结合位点及序列
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本文编号：2883392