miR-373-3p对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖和迁移的影响

发布时间：2020-11-15 08:51

　　 目的:探讨miR-373-3p表达变化对人子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖和迁移生物学特性的影响,并对是否调控LAST2的表达做进一步研究,阐明miR-373-3p促进子宫内膜癌增殖及迁移的可能分子机制,为子宫内膜癌潜方法:构建miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒载体,分别感染至子宫内膜癌HEC-1A细胞中,采用实时荧光定量PCR法检测感染后的HEC-1A细胞中miR-373-3p的表达变化,采用CCK-8法检测miR-373-3p对细胞增殖能力的影响,采用划痕观察miR-373-3p对细胞间接迁移能力的影响,采用Transwell小室实验分析miR-373-3p对细胞直接迁移能力的影响。通过进一步的生物信息学软件预测miR-373-3p的潜在靶基因,并运用Western Blot实验检测上调或下调miR-373-3p的子宫内膜癌HEC-1A细胞中LAST2的表达,初步验证miR-373-3p的作用靶点。结果:测序结果证实成功构建人miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒载体。miR-373-3p mimics和inhibitor分别成功上调和下调子宫内膜癌细胞株HEC-1A中miR-373-3p的表达,CCK-8结果显示上调miR-373-3p的表达能够明显促进子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖能力,而沉默miR-373-3p的表达明显抑制HEC-1A细胞增殖能力;划痕和Transwell小室结果表明过表达miR-373-3p明显促进子宫内膜癌HEC-1A细胞迁移能力,而低表达miR-373-3p则降低了HEC-1A细胞的迁移能力。根据生物信息学软件靶基因预测提示LATS2是miR-373-3p靶基因之一,Western Blot实验表明过表达miR-373-3p明显抑制了子宫内膜癌HEC-1A细胞中LATS2蛋白表达,而低表达miR-373-3p明显增高HEC-1A细胞LATS2蛋白表达。结论:miR-373-3p在子宫内膜癌HEC-1A细胞中可能发挥癌基因作用,过表达miR-373-3p能够促进HEC-1A细胞的增殖和迁移能力,而低表达miR-373-3p则抑制HEC-1A细胞的增殖和迁移能力。miR-373-3p可能通过调控LATS2表达影响子宫内膜癌的发生发展,是一个治疗子宫内膜癌的潜在靶点。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

miR-373-3p 对子宫内膜癌细胞 HEC-1A 增殖和迁移的影响 2018 届硕士学位论文结果一．质粒的测序鉴定结果（1）重组的 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 质粒送 DNA 测序，测序结果见图一，结果显示：质粒测序结果正确，以下为部分测序结果,该序列为GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 序列，表明 GV369-pre-miRNA-373-3mimics 慢病毒表达载体构建成功。

图 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 测序图谱Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid二．慢病毒滴度的测定慢病毒三质粒系统共转染 293T 细胞，转染 48h 后在荧光显微镜下察 293T 细 胞 可 见 GFP 绿 色 荧 光 蛋 白 表 达 。 慢 病 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度约为 4×108TU/ml，对应空慢病毒的病毒滴度约为 1 ×109TU/ml（图 3）。慢病毒 GV280- pre -miRN-373-3p inhibitor 的病毒滴度约为 6×108TU/ml，对应空载慢病毒的病毒度约为 4 ×108TU/ml（图 4）。

图 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 测序图谱Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid毒滴度的测定毒三质粒系统共转染 293T 细胞，转染 48h 后在荧光显T 细 胞 可 见 GFP 绿 色 荧 光 蛋 白 表 达 。 pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度约为 4×108TU/ml，病毒滴度约为 1 ×109TU/ml（图 3）。慢病毒 GV280- prinhibitor 的病毒滴度约为 6×108TU/ml，对应空载慢病毒4 ×108TU/ml（图 4）。
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本文编号：2884575