骨形态发生蛋白-9对人卵巢黄素化颗粒细胞增殖功能影响的研究
发布时间：2020-11-16 15:04
骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP-9)已被鉴定为在各种组织中调节细胞的增殖,凋亡和分化。然而,其在人卵母细胞成熟调节网络中的作用及其与卵泡刺激素(Follicle stimulation hormone,FSH)的关系仍然知之甚少。在这里,我们探讨了BMP-9对体外人卵巢黄体化颗粒细胞增殖的影响,并研究了BMP-9对FSH诱导的颗粒细胞增殖和类固醇激素合成影响的潜在机制。通过CCK-8试剂和EdU分析观察BMP-9对颗粒细胞增殖作用。利用RT-PCR及Westernblot技术测定FSH在颗粒细胞BMP-9刺激下诱导的相关mRNA,蛋白质水平。CCK-8结果显示,培养基中加入BMP-9上调颗粒细胞增殖,并表现剂量100 ng/ml(3.52±0.17倍,P0.05)和时间依赖性48小时(0.20±0.11,0.46±0.10,P0.05)。BMP-9与FSH联合培养组EdU标记细胞比例大于FSH单独培养组(3±0.82,5±0.67,P0.01)。此外,与观察到的CCK-8细胞活力趋势和EdU测定一致,BMP-9以剂量依赖性方式增加PCNA的mRNA水平(P0.05),并且增加FSH诱导的PCNA mRNA的表达。与FSH组相比,Westernblot结果显示BMP-9联合FSH培养组中,FSHR蛋白水平显着升高(2±0.02,2.7±0.13,P0.01);PKA蛋白水平均下降(6±0.17,4±0.06,P0.05);Ras(2.2±0.11,3±0.10,P0.01)和Raf蛋白水平(1.9±0.09,2.6±0.16,P0.01)及ERK1/2的磷酸化显着增加(1.9±0.05,3±0.08,P0.05)。在利用抑制剂阻滞颗粒细胞中FSHR,PKA,ERK蛋白表达和cAMP合成后,观察到PCNA,StAR,3β-HSD和P450arom蛋白水平出现相应变化。本研究的结果表明,BMP-9促进基础与FSH诱导的,与PCNA蛋白表达相关的人卵巢颗粒细胞增殖。此外,BMP-9可能是通过影响FSH诱导的FSHR,及其cAMP/PKA和MAPK信号传导途径来调节颗粒细胞增殖与类固醇的合成。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R711.6
【部分图文】：
采用均数±标准差(X±SD)表示。应用足正太方差齐，则使用方差分析对snq检验分析。P< 0. 05作为差异显著结 果胞的体外分离培养与鉴定人卵巢颗粒细胞中，具有高度细胞特和胞质，呈棕褐色着染，细胞核呈深0%，表明分离培养的卵泡颗粒细胞
CCK8 检测一定时间（0h,12h,24h,36h,48h,60h)内 BMP9 蛋白干预原代人卵巢颗粒细胞（GCs）活力产生的影响。对照组 OD 值在 12h 开始上升，48h 达顶峰后进入平台期，各测量时间 OD 值与 0h 比较差异均有统计学意义（P<0.05）。添加 BMP-9（100ng/ml）组 OD 值在 6h 开始上升，48h显著升高达到顶峰并进入平台期，与 0h 比较差异均有统计学意义（0.2±0.11,0.46±0.10，P<0.05）。OD 值在 36h 显著升高并高于对照组最大 OD 值，差异有统计学意义（P<0.05）(Fig.2A)。2.2 不同浓度 BMP-9 对颗粒细胞活力的影响浓度梯度 BMP-9 蛋白（0,5,10,20,50,100ng/ml）干预原代人卵巢颗粒细胞（GCs）48 小时后进行 CCK8 试剂检测。其结果显示：与对照组（OD值）相比，不同浓度 BMP9 均上调颗粒细胞的活性（P<0.05），并随浓度梯度活性递增，并在 100ng/ml 对细胞活性的影响最为显著（3.52±0.17 倍，P<0.01）(Fig.2B)。A B
BMP-9 对 rFSH 诱导的人卵巢黄素化颗粒细-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的 DN与 Apollo 荧光染料的特异性反应快速检测细胞核都显示出 Hoechst33342 染色的蓝色荧代表正在复制的细胞，绿色细胞数量/蓝色细 BMP-9 蛋白处理 48h 后，FSH 诱导组与单独作用组比较，显示更大比例的 EdU 标记作用组的细胞增殖率最高，差异有统计学意义（Fig.3）
【参考文献】
本文编号：2886371
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R711.6
【部分图文】：
采用均数±标准差(X±SD)表示。应用足正太方差齐，则使用方差分析对snq检验分析。P< 0. 05作为差异显著结 果胞的体外分离培养与鉴定人卵巢颗粒细胞中，具有高度细胞特和胞质，呈棕褐色着染，细胞核呈深0%，表明分离培养的卵泡颗粒细胞
CCK8 检测一定时间（0h,12h,24h,36h,48h,60h)内 BMP9 蛋白干预原代人卵巢颗粒细胞（GCs）活力产生的影响。对照组 OD 值在 12h 开始上升，48h 达顶峰后进入平台期，各测量时间 OD 值与 0h 比较差异均有统计学意义（P<0.05）。添加 BMP-9（100ng/ml）组 OD 值在 6h 开始上升，48h显著升高达到顶峰并进入平台期，与 0h 比较差异均有统计学意义（0.2±0.11,0.46±0.10，P<0.05）。OD 值在 36h 显著升高并高于对照组最大 OD 值，差异有统计学意义（P<0.05）(Fig.2A)。2.2 不同浓度 BMP-9 对颗粒细胞活力的影响浓度梯度 BMP-9 蛋白（0,5,10,20,50,100ng/ml）干预原代人卵巢颗粒细胞（GCs）48 小时后进行 CCK8 试剂检测。其结果显示：与对照组（OD值）相比，不同浓度 BMP9 均上调颗粒细胞的活性（P<0.05），并随浓度梯度活性递增，并在 100ng/ml 对细胞活性的影响最为显著（3.52±0.17 倍，P<0.01）(Fig.2B)。A B
BMP-9 对 rFSH 诱导的人卵巢黄素化颗粒细-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的 DN与 Apollo 荧光染料的特异性反应快速检测细胞核都显示出 Hoechst33342 染色的蓝色荧代表正在复制的细胞，绿色细胞数量/蓝色细 BMP-9 蛋白处理 48h 后，FSH 诱导组与单独作用组比较，显示更大比例的 EdU 标记作用组的细胞增殖率最高，差异有统计学意义（Fig.3）
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 叶婧;丁婷;杜小芳;杨书红;沈薇;石良艳;罗爱月;王世宣;;不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响[J];中国现代医学杂志;2013年17期
2 靳玉甫;覃爱平;;卵巢颗粒细胞P450芳香化酶研究进展[J];广西医科大学学报;2008年06期
本文编号：2886371
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