宫颈鳞状细胞癌中抑制元件1沉默转录因子（REST）调控KCa3.1表达机制初步研究

发布时间：2020-11-21 07:55

　　 目的:中电导钙激活钾离子通道(KCa3.1)在宫颈组织中的表达上调与宫颈鳞状细胞癌的发生及发展有密切的关系,探讨抑制元件l沉默转录因子(repressor element 1silencing transcription factor,REST)又称为神经元限制性沉默因子(neuron restrictive silencing factor,NRSF)在宫颈鳞状细胞癌组织中表达及其对中电导钙激活钾离子通道(KCa3.1)的影响,初步研究宫颈鳞状细胞癌中KCa3.1上调机制。方法:通过查阅整理数据库(NCBI、UCSC、Bio GPS)了解REST在不同组织中的表达情况,分析REST在不同组织以及宫颈组织中的表达情况。通过收集宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织和正常宫颈组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测不同组织中REST与KCa3.1的mRNA表达量,采用免疫组织化学方法检测不同组织中REST蛋白的表达水平。使用染色质免疫沉淀(ChIP)和定量PCR方法检测REST是否能在KCa3.1启动子区抑制元件1(Repressor Element l,RE1)位点处富集以及相应的程度。结果:通过分析整理数据库发现REST在分化成熟的神经组织中低表达,在正常非神经组织中高表达,在正常的宫颈组织中REST的表达较高。qRT-PCR检测发现宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织、正常宫颈组织中RESTmRNA相对表达量分别为0.46±0.06、0.89±0.13、1.00±0.12;宫颈鳞状细胞癌组织中RESTmRNA相对表达量较癌旁组织和正常宫颈组织分别下降48%、54%。宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织、正常宫颈组织中KCa3.1mRNA表达量分别为2.14±0.35、1.18±0.21、1.00±0.13;宫颈鳞状细胞癌组织中KCa3.1mRNA表达量较癌旁组织和正常宫颈组织分别上升81%、114%。RESTmRNA表达量在宫颈鳞状细胞癌组织中较癌旁组织及正常宫颈组织明显降低(P0.05),KCa3.1mRNA表达量在宫颈鳞状细胞癌中较癌旁组织及正常宫颈组织明显增加(P0.05)。免疫组织化学发现在细胞浆与细胞核处均能观察到REST蛋白阳性反应,在正常宫颈组织中均检测到REST蛋白不同程度的表达,阳性率为100%,宫颈鳞状细胞癌组织中REST蛋白的阳性率为40%,REST蛋白表达量在宫颈鳞状细胞癌组织中较正常宫颈组织明显降低(P0.05)。ChIP-qPCR发现REST能结合在KCa3.1启动子区RE1位点处,REST在正常宫颈组织、癌旁组织、宫颈鳞状细胞癌组织中RE1位点处的富集量分别为0.41±0.03、0.36±0.041、0.16±0.008;REST在宫颈鳞状细胞癌组织中的富集量相比正常宫颈组织下降了约60.1%,相比癌旁组织下降了约56%。REST在宫颈鳞状细胞癌中富集的量要显著低于正常宫颈组织和癌旁组织(P0.05)。结论:宫颈鳞状细胞癌组织中REST的表达较正常宫颈组织及癌旁组织均有明显降低,REST可以通过与KCa3.1启动子RE1位点处结合负调控KCa3.1表达。前期研究结果显示KCa3.1在宫颈癌中表达量上升,促进宫颈癌细胞生长,增加宫颈癌细胞的侵袭转移能力,因此宫颈鳞状细胞癌组织REST表达下调导致其对KCa3.1基因表达的抑制减弱,导致KCa3.1基因表达量上升,增强KCa3.1钾离子通道的活性,促进宫颈鳞状细胞癌细胞生长、侵袭和转移。
【学位单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

西 南 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文结 果1 查阅整理不同数据库中 REST 基因的表达查阅整理不同数据库得出 REST 基因在不同组织中的表达情况如图 1所示。REST 在正常非神经组织（结肠、肾上腺、肝脏、肺、卵巢、肾脏、子宫、乳腺、宫颈）中高表达，在分化成熟的神经组织（大脑、小脑、大脑皮层、下丘脑）中低表达，在正常宫颈组织中高表达。

西 南 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文表 2 RNAOD260/280 值及浓度Table 2 RNAOD260/280 value and concentration泳A 琼脂糖电泳如 3 所示，图中 28S 和 18S 条带明亮、清晰 条带最淡，表明提取的 RNA 无明显降解，可用于后续试样品 OD260/280 浓度(ng/μl)鳞状细胞癌织组织（CC） 1.98 190.9癌旁组织(AT) 1.80 216.4正常宫颈组织(NC) 1.88 247.3

图 4 A RESTmRNA 相对表达量 B KCa3.1mRNA 相对表达量宫颈鳞状细胞癌（CC）、癌旁组织(AT)、正常宫颈组织(NC)，*，P<0.05。Figure 4 A relative expression of REST mRNA；B relative expression of RESTmRNA Cervical squamous cell carcinoma (CC), paracancer tissue (AT), normal cervicaltissue (NC), *, P<0.053 免疫组织化学检测 REST 蛋白的表达情况3.1 IKCa3.1 蛋白的表达情况课题组前期采用免疫组化检测 30 例宫颈癌组织及 18 例正常宫颈组织中 IKCa3.1 的表达情况如图 5，结果显示：IKCa3.1 主要分布在细胞核和细胞膜上（图中 5 箭头处），在宫颈鳞状细胞癌组织中 IKCa3.1 蛋白的阳性率为 100%，正常宫颈组织中 IKCa3.1 的阳性率 5.56%，宫颈鳞状细胞癌组织中 IKCa3.1 蛋白的表达较正常宫颈组织明显升高(P＜0.05)[13]。
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本文编号：2892763