Nanog介导FSH诱导卵巢癌的转移和侵袭

发布时间：2017-04-08 07:02

  本文关键词：Nanog介导FSH诱导卵巢癌的转移和侵袭，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨Nanog在卵巢癌组织中的表达,以及FSH诱导的卵巢癌转移和侵袭中的作用。方法:使用western blot检测永生化卵巢上皮细胞Moody,良性卵巢肿瘤细胞Mcv152和卵巢癌细胞Hey,Ho8910,SKOV3中Nanog的表达。使用FSH以浓度梯度和时间梯度的方式处理SKOV3细胞,western blot检测Nanog蛋白表达。使用FSH处理si-Con或si-Nanog转染卵巢癌SKOV3细胞,实验设4组:对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog),实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)。使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测四组细胞转移和侵袭的能力,western blot分析四组细胞中Nanog的蛋白表达。应用免疫组织化学法检测Nanog在卵巢癌组织中的蛋白表达情况。结果:卵巢癌细胞系Hey,Ho8910,SKOV3中Nanog的表达明显高于永生化和良性卵巢上皮细胞系(P0.05)。FSH上调Nanog的表达以浓度和时间依赖的方式。对于迁移和侵袭能力,对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog)明显低于实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)(P0.05)。卵巢癌组织中的Nanog表达水平明显高于正常卵巢组织(P0.05),Nanog蛋白表达与卵巢癌转移相关。结论:Nanog是FSH重要的下游靶基因,介导FSH诱导的卵巢癌转移作用。第一部分Nanog在不同类型卵巢细胞株中的表达及调控目的:选取合适的卵巢癌细胞株作为实验细胞株,检测Nanog在不同类型卵巢癌细胞中的表达情况;研究卵泡刺激素(FSH)对Nanog表达的调控作用。方法:(1)通过Western blotting技术检测永生化上皮性卵巢细胞株Moody,良性卵巢肿瘤细胞株Mcv-152及上皮性卵巢癌细胞株Hey、Ho8910和SKOV3中Nanog的蛋白表达的情况。(2)使用不同浓度(Con,5m IU/ml,25m IU/ml,50m IU/ml,100m IU/ml)的卵泡刺激素(FSH)刺激上皮性卵巢癌细胞株SKOV3,使用Western blotting检测Nanog蛋白的表达情况;使用50m IU/ml的FSH于不同时间(Con,3h,6h,12h,24h)刺激卵巢癌细胞株SKOV3,Western blotting检测Nanog的蛋白的表达情况。结果:(1)Nanog在上皮性卵巢癌细胞株Hey(1.659±0.09),Ho8910(1.659±0.075)和SKOV3(2.130±0.129)中的表达明显高于永生化的正常卵巢上皮细胞株Moody(0.678±0.06)和良性卵巢肿瘤细胞株Mcv-152(1.371±0.073)。Hey、Ho8910和SKOV3细胞株的Nanog表达相对于Moody的Nanog表达差异具有统计学意义(P=0.006,P=0.004,P=0.004)。SKOV3的Nanog表达相对于Mcv-152的Nanog表达差异具有统计学意义。(2)在一定浓度范围内,FSH能显著上调上皮性卵巢癌细胞SKOV3中Nanog的蛋白表达,而且以剂量依赖的方式,在FSH浓度为50m IU/ml上调作用最明显。(3)在一定时间范围内(24h),FSH能显著上调上皮性卵巢癌细胞SKOV3中Nanog的蛋白表达,作用方式呈时间依赖的方式。结论:(1)相对正常卵巢或者卵巢良性肿瘤细胞,Nanog在卵巢癌细胞中表达明显上调。(2)在一定浓度和时间范围内,FSH能够显著上调卵巢癌细胞SKOV3中Nanog的蛋白表达水平。第二部分Nanog介导FSH诱导卵巢癌细胞的迁移和侵袭目的:探索Nanog在FSH诱导的卵巢癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法:以上皮性卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,用RNA干扰技术敲除Nanog在SKOV3细胞中的表达,处理分为四组:Con+si-Con,FSH+si-Con,Con+si-Nanog和FSH+si-Nanog,同时使用FSH刺激并设立对照。使用划痕实验(wound healing assay)检测干扰Nanog后,检测FSH对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响。使用Transwell侵袭实验(Transwell invasion assay)检测干扰Nanog后,检测FSH对卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响。结果:(1)FSH刺激明显增加SKOV3细胞迁移能力(P0.05),使用si-Nanog干扰Nanog表达,明显减弱了FSH诱导的细胞迁移(P0.05)。Con+si-Nanog(0.815±0.028)组细胞迁移距离相对于Con+si-Con(0.670±0.021)组细胞迁移距离具有统计学意义(P=0.02)。FSH+si-Nanog(0.710±0.020)组细胞迁移距离相对于FSH+si-Con(0.355±0.025)组细胞迁移距离具有统计学意义(P=0.004)。(2)FSH处理显著增加卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力(P0.05),干扰Nanog表达,明显阻断了FSH诱导的卵巢癌增加的侵袭能力(P0.05)。Con+si-Nanog(2.5±0.7)组细胞侵袭能力相对于Con+si-Con(9±1.5)组细胞侵袭能力具有统计学意义(P=0.028)。FSH+si-Nanog(10±1.6)组细胞侵袭能力相对于FSH+si-Con(25±1.3)组细胞侵袭能力具有统计学意义(P=0.008)。结论:在上皮性卵巢癌细胞SKOV3中,Nanog介导FSH诱导的上皮性卵巢癌细胞的迁移和侵袭。第三部分Nanog在卵巢组织中表达与卵巢癌转移的关系目的:检测Nanog在正常卵巢组织和卵巢癌组织中的表达,并分析其在卵巢癌组织中的表达与相关临床病理资料的关系。方法:应用免疫组织化学的方法检测5例正常卵巢组织和60例卵巢癌组织中Nanog的表达情况,比较两种组织中Nanog表达的差异,并通过统计学方法分析其在卵巢癌组织中的表达与相关临床病理资料的关系。结果:免疫组化结果表明:Nanog在正常卵巢组织不表达或低表达,在卵巢癌组织中高表达,其表达具有统计学差异(P=0.008)。而且,在卵巢癌组织中,Nanog表达与卵巢癌转移相关(P=0.001)。结论:在上皮性卵巢癌组织中,Nanog表达明显上调,且其表达与肿瘤的转移正相关。
【关键词】：卵巢癌 FSH Nanog 迁移 侵袭
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要7-11
• ABSTRACT11-15
• 中英文名词对照15-16
• 前言16-22
• 第一部分 Nanog在不同类型卵巢细胞株中的表达及调控22-37
• 1.1 实验材料和方法22-32
• 1.2 结果32-35
• 1.3 讨论35-37
• 第二部分 Nanog介导FSH诱导卵巢癌细胞的迁移和侵袭37-45
• 2.1 实验材料和方法37-40
• 2.2 结果40-43
• 2.3 讨论43-45
• 第三部分 Nanog在卵巢组织中的表达与卵巢癌转移的关系45-54
• 3.1 实验材料和方法45-51
• 3.2 结果51-53
• 3.3 讨论53-54
• 结论54-55
• 参考文献55-59
• 综述59-65
• 参考文献62-65
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文65-66
• 致谢66

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