常氧和低氧下IL-6经JAK/STAT3通路调节EOC细胞HIF-1α的作用

发布时间：2020-12-18 09:11

　　目的:探讨在常氧和低氧条件下IL-6是否经JAK2/STAT3通路上调人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞中HIF-1α的转录活性与表达,进而促进肿瘤缺氧耐受和肿瘤形成,为开展以IL-6及相关信号分子为靶点的EOC诊断及治疗提供新思路。方法:1.常规培养四种人卵巢癌细胞（A2780,SKOV3,ES-2,OVCAR3）,分别抽提总RNA和蛋白,进行实时定量PCR反应和Western Blotting测定,前者检测STAT3及HIF-1αm RNA的表达水平,后者检测磷酸化/总STAT3及HIF-1α蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上述四种卵巢癌细胞中IL-6的分泌水平。2.选择IL-6分泌水平具有显著差异的人卵巢癌细胞系A2780及SKOV3,分别应用不同浓度的IL-6（1 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml）处理不同时间（6 h,12 h,24 h,48 h）后,抽提总RNA,进行定量q PCR反应,检测STAT3及HIF-1αm RNA的表达水平,用以确定外源性IL-6作用的最适浓度和最佳时间点。3.IL-... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

EOC细胞中IL-6、STAT3、HIF-1α的mRNA水平

天津医科大学硕士学位论文中 IL-6、STAT3 及 HIF-1α 的蛋白表达 ELISA 法检测了常氧条件下四种卵巢癌细胞如图 2A 所示）A2780 细胞几乎不分泌 IL-6，度的 IL-6 分泌，SKOV3 细胞的 IL-6 分泌水平应用 Western Blotting 技术检测 EOC 细胞中总3）与 HIF-1α 的蛋白表达水平，发现在四种 E在 A2780 细胞中表达最低，SKOV3 细胞中表

天津医科大学硕士学位论文处理 A2780 细胞 30 min 和 12 h 时，HIF-1α 的蛋白表达水平显著升高，分别为对照组的 3.01 和 3.66 倍；从图 4.A 结果还可以看出，在 HIF-1α 蛋白表达水平显著升高时，p-STAT3 的蛋白表达水平也相应升高，分别为对照组的 2.58 和 3.18倍。在处理 SKOV3 细胞时，如图 3.C-D 所示，加入不同浓度 IL-6 处理不同时间后，与对照组相比，STAT3 和 HIF-1α 的基因表达水平均有不同程度升高。在 IL-6（10 ng/ml）作用组处理 12 h 时，HIF-1α 基因表达水平明显升高。图 4.B 结果表明，IL-6（10 ng/ml）作用组处理 SKOV3 细胞不同时间点时，HIF-1α 的蛋白表达水平持续升高，且 IL-6 的加强作用持续至 12 h，p-STAT3 的蛋白表达水平也相应升高，趋势与 HIF-1α 的变化一致。综合图 3 及图 4 的结果，我们分别选择 IL-6（50 ng/ml）和 IL-6（10 ng/ml）处理 A2780 及 SKOV3 细胞 12 h 作为最适浓度和处理时间。


本文编号：2923746