Orai1体外干预对宫颈息肉炎症反应的作用

发布时间：2020-12-25 12:20

　　目的探讨Orai1的体外干预对宫颈息肉（CP）中炎症反应的作用。方法收集复旦大学附属华山医院北院病理科2016年至2019年期间40例CP患者的息肉组织,用器官培养技术进行体外培养,然后将2-氨基乙基联苯基硼酸酯（2-APB）作为体外干预手段,以免疫组织化学染色方法检测2-APB干预前后CP中Orai1蛋白的表达情况,接着用酶联免疫吸附试验（ELISA）和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测2-APB干预前后CP组织中Orai1蛋白及其mRNA的含量,最后再用上述方法检测CP组织中白介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α及其mRNA的浓度。结果免疫组织化学染色显示CP标本中表达Orai1蛋白,而且2-APB干预后该蛋白的染色评分减少;ELISA法和实时定量RT-PCR法检测结果表明,2-APB干预后CP中Orai1蛋白及其mRNA的含量均较干预前减少（t值分别为5.76、10.85,均P<0.05）,炎症介质IL-1β、TNF-α及其mRNA的浓度也显著低于干预前（t值分别为15.28、6.35、7.10、17.74,均P<0.05）。结论 Orai1... 

【文章来源】：中国妇幼健康研究. 2020年09期

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

IL-1β和TNF-α的ELISA和实时定量RT-PCR检测

将CP组织以器官培养的方法进行体外培养[4]。将获取的息肉组织在无菌条件下分割成2～3mm3大小的组织块,用含有5μg/mL两性霉素B和300μg/mL青霉素G的磷酸盐缓冲液清洗,再用含有10%小牛血清和20μg/mL庆大霉素的浓度为98%的达尔伯克(氏)必需基本培养基(Dulbecco" s minimum essential medium,DMEM)再清洗,随后加入50μmol/L 2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)(美国Sigma-Aldrich)共孵育1h,接着将组织块置于1cm×1cm大小的湿明胶海绵上,息肉面朝上,另一面朝下,将明胶海绵置于含有3mL培养液的6孔板上,使息肉高于液面,6孔板置入温度为37°C和含有5%CO2空气的潮湿孵育箱中,并进行转速为15rpm的连续转动24h,最后收集组织块进行下一步研究。见图1。1.3免疫组织化学染色

本研究中IHC染色从组织形态学分析,发现Orai1蛋白阳性染色定位于鳞状上皮细胞膜,干预前后CP组织中均呈现Orai1蛋白阳性染色表现,但干预前染色面积和强度更大,见图2;以IHC进行综合评分,干预前CP染色评分均在4～9分,干预后评分均在1～3分,见表1。表1 Orai1蛋白表达Table 1 Expression of Orai1 protein 评分 干预前(n=40) 干预后(n=40) 评分1～3 0/40 40/0 评分4～9 40/0 0/40

【参考文献】：
期刊论文
[1]宫颈炎患者宫颈癌筛查前后心理状态变化及心理干预研究[J]. 高宝侠,刘润润,崔绪琴,谢琪,张忠明.  中国妇幼健康研究. 2017(11)



本文编号：2937642