卵泡体外培养和体外成熟卵母细胞的核质质量分析

发布时间：2021-01-01 02:33

　　目的:卵母细胞体外成熟（IVM）和卵泡的体外培养都是治疗不孕症的很有前景的辅助生殖技术（ART）,但由于其胚胎发育潜力低,仍不是人类ART的常规技术。本研究的目的是阐明体外成熟卵母细胞质量下降的可能原因,建立并完善卵泡无血清体外培养体系。方法:1、检测MII时期卵母细胞线粒体功能相关指标包括:线粒体的分布、线粒体膜电位、线粒体DNA拷贝数（mtDNA）、ROS水平。2、检测MII时期卵母细胞细胞核相关指标包括纺锤体组装和染色体排列。3、检测MII时期卵母细胞孤雌激活后产生钙波的能力以及胚胎发育情况。结果:1、结果表明,具有卵丘细胞的卵母细胞体外培养后的成熟率高于不具有卵丘细胞的卵母细胞;与体内成熟卵母细胞相比,体外成熟卵母细胞线粒体分布异常,线粒体膜电位降低,活性氧水平升高,线粒体DNA拷贝数增加,无论有无卵丘细胞,这些结果在体外成熟的卵母细胞中并无差异;体外成熟卵母细胞孤雌激活后产生钙离子振荡能力和胚胎发育率显著降低,特别是在没有卵丘细胞的卵母细胞体外成熟后,有近一半的卵母细胞未能在含氯化锶的孤雌液激活中产生钙波。2、我们建立了一种具有三维效果的二维卵泡无血清体外培养体系,该体系可以... 

【文章来源】： 李昂 山西医科大学

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

体外培养成熟率和卵母细胞线粒体分布的差异A，DO和COC组第一极体排出率(MII率)，**代表两组比较差异有统计学意义(P<0.01)

山西医科大学硕士学位论文12异常的分布。C，三组卵母细胞线粒体分布正常与异常的比率。****代表两组比较差异有统计学意义:P<0.0001。比例尺，20μm。2.2体内、外成熟的卵母细胞的线粒体膜电位差异JC-1染色用于评估线粒体膜电位时，活跃的线粒体主要分布于细胞外周，而低活性的线粒体主要分布于卵母细胞的胞质中心(图2A)。体外成熟组（COC组与DO组）的线粒体膜电位显著低于体内成熟卵母细胞(P<0.01)，但COC组与DO组间的差异无统计学意义(图2B)。图2三组卵母细胞的线粒体膜电位差异A，显示的是高膜电位(红色)、低膜电位(绿色)线粒体在三组卵母细胞中的分布。B，显示的是红色荧光与绿色荧光相对荧光强度的比值。**表示与CTRL组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。比例尺，20μm。2.3体内、外成熟的卵母细胞内ROS水平差异我们测定了三组卵母细胞中ROS的水平，在COC和DO组中活性氧的分布在细胞质中聚集成簇(图3A)。COC组和DO组的DCFH-DA荧光强度明显高于体内组，说明ROS的生成增加(图3B)。然而，在COC和DO组之间，ROS的产生没有差异(图3B)。

山西医科大学硕士学位论文13图3三组卵母细胞中ROS水平的差异A,通过共聚焦显微镜拍摄卵母细胞中ROS产生的代表性图像B，三组卵母细胞通过免疫荧光染色法测定ROS水平所得到的统计结果。**代表两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。比例尺，20μm。2.4体内、外成熟的卵母细胞线粒体DNA拷贝数差异我们通过实时定量PCR仪比较了三组卵母细胞的mtDNA拷贝数(图4)。在体内成熟卵母细胞的mtDNA拷贝数为338958±16464，COC组卵母细胞的mtDNA拷贝数为433055±9732，而DO组卵母细胞的mtDNA拷贝数为457202±15833。获得的数据显示，体外成熟卵母细胞的mtDNA拷贝数显著升高(P<0.01)，而COC组和DO组的mtDNA拷贝数无显著差异，但DO组的mtDNA拷贝数呈上升趋势。图4三组卵母细胞的线粒体DNA(mtDNA)拷贝数差异体内与体外的两组（DO组与COC组）比较差异有统计学意义(P<0.01)。DO组与COC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。


本文编号：2950785