基于聚β-氨基酯和HPV16靶向CRISPR/shRNA的纳米粒子作为HPV16相关的宫颈恶性肿瘤的潜在药物

发布时间：2021-01-07 02:18

　　实验目的:检测宫颈癌组织DNA中HPV整合情况、HPV和HMGA2拷贝数的变化,以及HMGA2蛋白表达分别在未病变宫颈、CIN和宫颈癌三种不同的组织中的水平,预测出HMGA2基因与宫颈恶变之间可能的关系,并探索HMGA2在宫颈癌变过程中可能起到的作用机制。实验方法:1.收集新鲜的宫颈癌的样本,提取DNA样本,并通过DIPS-PCR的方法检测出宫颈癌样本中的HPV整合情况以及整合位点。2.FISH探针技术检查HMGA2和HPV在不同宫颈病变阶段的宫颈组织中的拷贝数及HPV整合在HMGA2基因位置的差异;免疫组织化学方法（IHC）检测HMGA2蛋白在无病变宫颈、CIN和宫颈癌三种组织样本中的表达量;3.利用RT-PCR、Western技术、细胞流式检测凋亡、克隆形成等实验方法,检测过表达/沉默HMGA2基因后对于HPV16阳性的S12、Si Ha和Ca Ski三种细胞系生长的影响,Bcl-2基因和Caspase3基因在RNA水平和蛋白水平表达的改变,探索HMGA2与宫颈癌变可能的关系及可能的机制通路。实验结果:1.在24个新鲜宫颈癌组织DNA样本中共检测到25个HR-HPV整合位点;HMG... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：91 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

HMGA2蛋白的IHC染色以及HPV和HMGA2运用FISH技术检测的荧光信号

在任何连续的宫颈病变之间 HPV 拷贝数没有显着差异（图 2D；CINI vs CINII，P = 0.938；CINII vs CINIII，P = 0.136；CINIII vs I 期宫颈癌；P = 0.043；I 期宫颈癌 vsII 期宫颈癌，P = 0.052）。HMGA2 拷贝数在正常宫颈活组织检查样本与 CIN、正常宫颈组织与宫颈癌样本之间均无显著差异（分别为 P = 0.499 和 P = 0.457）（图 2B）。此外，在任何连续的 CIN 和宫颈癌各病理阶段之间 HMGA2 拷贝数没有显着差异（图2E；CINI 对 CINII，P = 0.121；CINII 对 CINIII，P = 0.163；CINIII 对 I 期宫颈癌；P =0.948; I 期宫颈癌对 II 期宫颈癌，P = 0.288）。HMGA2 的蛋白表达运用累计光密度值（IOD）评价。宫颈癌样本中 HMGA2 的平均 IOD 值高于 CIN 样本（图 2C 和表 3，132507.00 比 16485.41，P <0.01）。在 I 期宫颈癌中，HMGA2 的 IOD 值也高于 CINIII 样本（图 2F 和表 3,136380.20 对 9813.53，P <0.01）。 在 CIN 和宫颈癌的连续阶段之间未观察到其他显着差异（图 2F；正常对CINI，P = 0.589；CINI 对 CINII，P = 0.286；CINII 对 CINIII，P = 0.962；宫颈癌 I 期对宫颈癌 II 期，P = 0.791）。

华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文达（C）的统计分析。HPV 拷贝数（D），HMGA2 拷贝数（E）和 HMGA2 蛋白表达（F）在不同阶段宫颈病变中的表达。我们通过 FISH 技术也在同 个样本中同时检测到了 HPV（红色）和 HMGA2（绿色）的拷贝数。DIPS-PCR 显示 HPV 整合入 HMGA2 基因的两个样品中的每 个中都检测到了融合信号，而其他样本中没有融合信号（图 3）。


本文编号：2961702