融合质粒HPV16E7-IL28B与IL7-IL15的构建及其在毕赤酵母系统中的表达

发布时间：2021-01-07 20:45

　　目的本实验通过构建pPIC9k-his-HPV16E7-IL-28B（Linker）及pPIC9k-IL-7-IL-15（Linker）分泌型重组表达质粒（以下简写为pPIC9k-E7-IL28B、pPIC9k-IL7-IL15）,转化毕赤酵母进行诱导表达,从而为研究其对宫颈癌的免疫治疗作用提供新的参考思路和依据奠定基础。方法1.根据毕赤酵母密码子使用频率表,利用OptimumGene软件对基因E7-IL28B进行密码子优化;2.运用分子克隆技术分别构建重组表达质粒载体pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15;将重组表达载体pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15电转化入P.pastoris GS115中并进行多拷贝转子筛选;3.探索甲醇浓度、诱导温度、诱导时间、培养基pH值等不同条件下融合蛋白pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15的表达情况,同时对这两种融合蛋白运用SDS-PAGE进行分析。结果成功构建重组表达质粒载体pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15,并通过遗传霉素（G418）筛选到高拷... 

【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

密码子优化前后使用统计图

68% >30% 组质粒载体鉴定B 结果 pUC57-E7-Linker-IL-28B（这两种质粒为模板、以 2.2后，在 880bp 左右得到与bp 1 2 M

融合质粒 HPV16E7-IL28B 与 IL7-IL15 的构建及其在毕赤酵母粒载体 pPIC9K-E7-IL28B（优化前后）菌液 P 鉴定R 扩增后的目的基因及载体用 EcoR I、Not I 进物纯化（生工胶回收、产物纯化试剂盒），之后构成重组表达质粒载体。连接产物转 E.col（iD数个单克隆菌落，挑取部分单克隆在 LB 液体定,结果如下图 3-3、图 3-4。bp M 1 2 bp M 1 25000

【参考文献】：
期刊论文
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[2]Pichia pastoris X-33 ΔGT2缓解甘油对AOX1的阻遏并用于外源蛋白的高效表达[J]. 张震阳,杨艳坤,战春君,李翔,刘秀霞,白仲虎.  中国生物工程杂志. 2017(01)
[3]嗜麦芽寡养单胞菌角蛋白酶基因在毕赤酵母中的表达[J]. 李光磊,张娟,方真,隆明星,堵国成,陈坚.  生物技术通报. 2016(08)
[4]DC疫苗联合CIK细胞治疗39例中晚期宫颈癌的临床疗效观察及预后分析[J]. 江龙委,黄伟谦,姚露,张燕,艾月琴,郑劼,高艳荣,张闯,赵华,胡建华,贾绍昌,肖梅.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2015(06)
[5]共表达透明颤菌血红蛋白提高脂肪酶在毕赤酵母中的表达[J]. 卢俊裕,林影,梁书利,叶燕锐.  现代食品科技. 2014(06)
[6]表达乙肝表面抗原结合蛋白的毕赤酵母工程菌遗传稳定性研究[J]. 李津,范长胜,朱乃硕.  药物生物技术. 2014(01)
[7]不同碳源下毕赤酵母GS115蛋白组学分析[J]. 田小梅,任建洪,房聪.  中国生物工程杂志. 2012(01)

博士论文
[1]结核亚单位疫苗免疫方案和IL-7、IL-15对T细胞免疫记忆的影响[D]. 白春香.兰州大学 2018



本文编号：2963216