LRP5在宫颈癌发病中的作用机制研究

发布时间：2021-01-11 23:16

　　背景宫颈癌（Cervical cancer,CC）是常见的妇科恶性肿瘤之一,也是全球女性癌症死亡的第四大原因。经典Wnt/β-catenin信号通路的异常激活增强了CC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,是CC发生发展的重要原因之一。但是作为Wnt配体的辅助受体,LRP5在CC发病中的确切作用尚未得到充分证实,需要进一步探究。目的探讨激活或敲除LRP5基因后对CC细胞的影响,进而揭示LRP5基因在CC发病中的作用和分子机制。方法1.免疫组化:采用免疫组织化学染色方法对宫颈癌石蜡组织芯片进行染色,检测LRP5蛋白在正常组织及CC组织中的表达水平。2.构建LRP5基因敲除或激活的CC稳转细胞株a)质粒准备:购买可敲除LRP5基因的LRP5 CRISPR/Cas9 KO质粒,激活LRP5基因的LRP5 CRISPR Act质粒以及两者的对照质粒。b)筛选细胞:将HeLa细胞接种到6孔板中,用LRP5 CRISPR/Cas9 KO质粒（NC-KO作为对照质粒）或LRP5 CRISPR Act质粒（NC-Act作为对照质粒）转染细胞,之后用嘌呤霉素连续筛选。提取细胞RNA,通过qRT-PCR分析LRP5... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

LRP5在CC组织中表达上调注：图A为组织芯片的IHC染色（a,b,c放大100倍；d,e,f放大200倍）；图B为CC患者（n=291）

形成的克隆大小以及数量均小于对照组，表明敲除 LRP5 基因抑制了 HeLa 细胞体外克隆形成能力（P<0.05，图3-4 D）。细胞划痕愈合实验，在划痕后 0 h，36 h，72 h 拍摄图片，结果显示敲除 LRP5基因细胞划痕愈合较对照组减慢，提示敲除 LRP5 基因抑制 HeLa 细胞的迁移能力（P<0.05，图 3-4 E-F）。流式细胞术分析了敲除 LRP5 基因对 HeLa 细胞的细胞周期分布影响，与对照组相比，敲除 LRP5 基因 HeLa 细胞 S 期细胞数目减少

【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterization of genetically engineered mouse models carrying Col2a1-cre-induced deletions of Lrp5 and/or Lrp6[J]. Cassie A Schumacher,Danese M Joiner,Kennen D Less,Melissa Oosterhouse Drewry,Bart O Williams.  Bone Research. 2015(04)
[2]LRP5 polymorphism—A potential predictor of the clinical outcome in advanced gastric cancer patients treated with EOF regimen[J]. Xin Liu,Ming-Zhu Huang,Zhi-Yu Chen,Xiao-Yin Zhao,Chen-Chen Wang,Wei Peng,Ji-Liang Yin,Jin Li,Xiao-Dong Zhu.  Chinese Journal of Cancer Research. 2014(04)



本文编号：2971663