RASAL2对宫颈癌hela细胞的增殖调控及机制探讨

发布时间：2021-01-13 22:53

　　目的研究RAS激活物2（RAS protein activator like 2,RASAL2）对宫颈癌HeLa细胞生长增殖和侵袭转移的影响及其作用机制,为探讨RASAL2对宫颈癌HeLa细胞的调控机制奠定实验基础。方法1、体外培养宫颈癌HeLa细胞。2、构建过表达质粒GV40-myc-RASAL2。人RASAL2全长序列扩增,GV40-myc-RASAL2真核表达载体的构建和鉴定。3、基因转染:采用转染试剂LIP3000将RASAL2基因转入HeLa细胞中。实验分为未转染组、空载体转染组、RASAL2基因转染组。4、MTT法检测过表达RASAL2对HeLa细胞增殖的影响。5、划痕实验检测过表达RASAL2对HeLa细胞迁移的影响。6、Western blotting法检测RASAL2、上皮型钙粘蛋白（E-cadherin）、神经型钙粘蛋白（N-cadherin）、SNAIL、ZO-1、WEE1和CCNB1的蛋白表达。7、免疫荧光共定位证实RASAL2和WEE1在宫颈癌HeLa细胞中是否存在共定位。结果1、GV40-myc-RASAL2重组质粒鉴定:PCR鉴定和测序分析表明GV40-m... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

GV40-myc-RASAL2质粒构建和鉴定

五、Western blot 检测 E-cadherin，SNAIL,ZO-1，N-cadherin蛋白表达。RASAL2 基因转染 46 小时之后收集未转染组、GV40 空载体转染组，GV40-myc-RASAL2 转染组三组细胞。Western blot 检测关于侵袭转移的相关蛋白。如图 4 所示，在 HeLa 细胞中，GV40 空载体转染组相较未转染组无明显变化（p>0.05）。过表达 RASAL2 之后,N-cadherin，SNAIL,ZO-1 蛋白的表达明显低于未转染组和 GV40 空载体转染组(p<0.01)；但 E-cadherin 蛋白表达明显高于未转染组和 GV40 空载体转染组(p<0.01)。A B

图 5 A .RASAL2，WEE1，CCNB1 的蛋白表达情况 B. RASAL2，WEE1，CCNB1 灰度值比值结果七、免疫荧光实验检测 RASAL2 和 WEE1 在 HeLa 中共定位情况采用免疫荧光共定位技术检测RASAL2和WEE1在HeLa细胞中的共定位。结果表明，RASAL2 在细胞核和细胞质中均有表达，但主要表达在细胞核。WEE1在细胞核和细胞质中均有表达，也主要表达在细胞核中。免疫荧光结果显示RASAL2 和 WEE1 在 HeLa 细胞主要共定位在细胞核中（图 6）


本文编号：2975698