miR-365介导SGK1对滋养层细胞凋亡的影响及机制研究

发布时间：2021-01-14 17:56

　　第一部分mi R-365在自然流产蜕膜中的表达分析及其对滋养层细胞凋亡的影响目的:探究mi R-365在自然流产中的表达情况及其对滋养层细胞凋亡的影响。方法:应用mi RNA芯片技术,筛选自然流产蜕膜中差异表达的mi RNA,使用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）对芯片结果进行验证;利用p53-和MDM2-promoter荧光报告系统,筛选影响p53和MDM2活性的mi RNAs;构建mi R-365过表达慢病毒载体,转染HTR-8/SVneo细胞后,运用q RT-PCR和蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）技术分别检测p53和MDM2m RAN和蛋白表达水平,流式细胞术检测不同时间点细胞凋亡情况,透射电子显微镜观察细胞超微结构变化。结果:从自然流产蜕膜中筛选出7个上调mi RNAs和10个下调mi RNAs,其中mi R-365既可以使MDM2活性明显降低（P<0.01）,又能使p53活性明显升高（P<0.01）;MDM2 m RNA和蛋白水平在过表达mi R-365的HTR-8/SVneo细胞中均显著下... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

miRNA差异表达谱及8种miRNAs在流产蜕膜中的表达验证（与IA相比**，P<0.01）

27图 1.2 8 种 miRNAs 对 MDM2、p53 的影响（与 IA 比较，**，P <0.01；*，P <0.05）养层细胞凋亡之间的关系，我们用mi-365过表达慢病毒载体转染滋养层细胞系HTR-8/SVneo，构造miR-365过表达细胞模型。采用qRT-PCR检测miR-365过表达效果，结果显示，miR-365表达水平随转染时间的推移而增加，由此表明转染有效（图1.3）。qRT-PCR和WB的结果发现，在过表达miR-365的滋养层细胞中MDM

南京医科大学硕士学位论文的mRNA和蛋白水平显著下调，p53的mRNA和蛋白水平显著上调，且均具有时间依赖性（图1.4 A和B）；流式细胞分析结果显示，过表达的miR-365以时间依赖性的方式诱导细胞凋亡，且在转染36h后细胞周期明显停止在G1期（图1.4 C）；透射电子显微镜观察不同时间点滋养层细胞的超微结构变化发现，miR-365过表达慢病毒载转染HTR8/SVneo细胞后，12 h可观察到明显的凋亡，24 h和36 h细胞核染色质出现凝缩，凋亡小体明显（图1.4 D）。因此，miR-365具有促进滋养层细胞凋亡的功能。

【参考文献】：
期刊论文
[1]SGK1 inhibits cellular apoptosis and promotes proliferation via the MEK/ERK/p53 pathway in colitis[J]. Jian-An Bai,Gui-Fang Xu,Li-Jun Yan,Wei-Wen Zeng,Qian-Qian Ji,Jin-Dao Wu,Qi-Yun Tang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(20)
[2]早期自然流产绒毛组织miR-10b表达及意义[J]. 李怡,吴涛,栾丽霞,张蓓蕾,李三阳,尹国武.  现代生物医学进展. 2013(04)

博士论文
[1]microRNA在流产及早孕蜕膜组织中的表达及miR-199的功能鉴定[D]. 王煜.内蒙古大学 2015

硕士论文
[1]miRNA-144在复发性自然流产绒毛组织中的表达及其功能研究[D]. 陈冰.中南大学 2014



本文编号：2977274