SHP-2shRNA联合苦参碱对宫颈癌细胞增殖的影响

发布时间：2021-01-15 17:05

　　目的应用RNA干扰技术构建SHP-2基因重组慢病毒载体,研究SHP-2shRNA联合苦参碱对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法靶向构建SHP-2的shRNA序列慢病毒载体,将其转染至人宫颈癌Hela细胞以沉默SHP-2基因,用Real-time PCR（RT-PCR）测定Hela细胞SHP-2 mRNA,应用Western blot法测定SHP-2蛋白表达,CCK8法测定SHP-2基因沉默联合苦参碱对Hela细胞增殖的影响。结果设计并成功构建3组SHP-2基因的干扰序列（SHP-2 shRNA1、SHP-2 shRNA2和SHP-2 shRNA3）以及对照序列（NS）, RT-PCR检测结果表明SHP-2 shRNA2慢病毒载体干扰效率最佳。筛选稳定细胞后荧光显微镜观察感染效率较高,Western blot结果显示细胞中SHP-2蛋白表达明显被抑制。CCK8提示细胞的生长增殖能力明显受限,且随着时间延长,联合组（SHP-2 shRNA2+苦参碱）增殖最慢,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论成功构建出SHP-2基因的shRNA慢病毒干扰系统,SHP-2基因沉默... 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2020,55(02)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组载体 pHBLV-SHP2测序图谱

包装有重组慢病毒SHP-2shRNA的293T细胞 ×100

重组病毒以MOI=10感染HeLa细胞后的感染效果 ×100

【参考文献】：
期刊论文
[1]苦参碱及氧化苦参碱抑制肿瘤作用机制研究进展及展望[J]. 曹建,魏润杰,邓茹芸,姚树坤.  中草药. 2019(03)
[2]FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选[J]. 王一茹,姚斌伟,张艳,张明博,高菡静,唐杰.  南方医科大学学报. 2015(09)
[3]SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测[J]. 胡中倩,汪心怡,李菲菲,储著朗,邢小翠,李娟,查欣,瞿成奎,汪思应.  安徽医科大学学报. 2012(07)



本文编号：2979189