孕期褪黑激素和雌激素对胰岛素释放的影响

发布时间：2021-02-05 20:01

　　褪黑激素（Melatonin）是一种由下丘脑松果体分泌的吲哚类激素,它在调节机体的昼夜节律、免疫系统、内分泌系统、生殖和心血管系统中都发挥着重要的作用。褪黑激素的功能主要通过两种位于细胞膜上的褪黑激素受体（MTNR1A和MTNR1B）所介导。其中MTNR1B基因突变与胰岛β细胞的功能密切相关,同时基因组关联分析发现MTNR1B基因突变将增加2型糖尿病（T2DM）和妊娠糖尿病（GDM）的风险。在我们前期的临床调查过程中发现,西南地区的孕妇中,MTNR1B基因的单核苷酸多肽性显著影响着妊娠期间的胰岛素释放水平和血糖浓度。目前褪黑激素在妊娠过程中的对血糖影响的作用机制尚不清楚,本研究在构建MTNR1B突变体并选择雌三醇模拟妊娠环境的基础上,观察褪黑激素对胰岛素分泌的影响,期以从褪黑激素、雌激素对胰岛素释放的影响切入为妊娠糖尿病的诊治提供新的思路和方向。研究方法:（1）依据前期在西南地区收集的2000多例孕妇的MTNR1B外显子序列与妊娠血糖代谢的分析结果,课题组筛选并构建了3个与妊娠血糖代谢相关的MTNR1B突变体。分别为71G>A（G24E）、589A>G（S197G）、974... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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图１－２褪黑激素信号通路??

生长密度达到９０％左右时给予褪黑激素刺激，并设置不同的糖浓度模拟妊娠前期??和后期的血糖浓度变化，以ＤＭＳＯ组作为对照组。详细处理过程参照３．２．１．２，给??药处理后收细胞，提取全蛋ＷＢ检验结果如图２－３所示。??ＭＴＮＲ１Ｂ?ｒ?？一??ＧＡＰＤＨ??图２－３褪黑激素对ＭＴＮＲ１Ｂ的影响；褪黑激素处理后的目的基Ｈ表达相对于ＤＭＳＯ??组和空．自对照ＭＩＮ６组之间无明凝差异。??２．４讨论??本实验在小鼠胰岛细胞系ＭＩＮ６、小鼠脾脏细胞和人乳腺癌细胞系ＭＣＦ７中检??测内源性的ＭＴＮＲ１Ｂ基国的表达情况＜？结杲显示在ＭＩＮ６细胞中检测到内源性??ＭＴＮＲ１Ｂ的表达，而在阴性参照小鼠脾脏细胞和ＭＣＦ７细胞中几乎检测不到。所??以在后面的实验中使用ＭＩＮ６细胞系是合理的选择。继而将构建好的野生型，野生??型的突变表达载体以及窆载转染到ＭＩＮ６细胞中，从实验结果来着，我们可以明显??观察到转染野生型和突变型的ＭＩＮ６细胞中的目的蛋白表达量明显增高，说明载??体构建成功，且能够在ＭＩＮ６细胞中表达。在给予褪黑激素刺激后的ＭＩＮ６细胞的??目的基因表达检测实验中，我们发现褪黑激素刺激和外界糖浓度的改变并不会改??变ＭＴＮＲ１Ｂ在细胞中的表达量Ｖ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ作为一种定性半定量检测可能是导致??这种结果的．原因，所以后面的实验通过Ｅｌｉｓａ定量检测胰岛素的释放量来观察褪黑??激素、雌激素等对胰岛细胞的影响

?１５Ｍｍ，?２０Ｍｍ，?２５ｍＭ），模拟妊娠期间的血糖浓度变化，通过Ｅｌｉｓａ实验检??测胰岛素分泌情况，详细实验步骤参照３．２．１节。观察胰岛细胞系中随着糖浓度不??断升高后的胰岛素释放情况。结果如图３－１所示。??在小鼠胰岛细胞系ＮＩＴ－１中，胰岛素释放量随着外界糖浓度的提高而增多，在??接近２５ｍＭ的糖浓度时达到高峰并趋于平缓；在小鼠细胞系ＭＩＮ６的糖刺激实验??中，胰岛素释放量伴随外界糖浓度的增加先有一个胰岛素释放量快速攀升的过程，??在２５ｍＭ糖浓度附近达到最大释放量并趋于平缓。将两种细胞系的糖刺激曲线相??比较，ＭＩＮ６细胞在高糖（２５ｍＭ）和低糖（５ｍＭ）的下的胰岛素释放量的差异性??更显著，ＭＩＮ６细胞的胰岛素释放在糖刺激下趋势线更明显。??３１??

【参考文献】：
期刊论文
[1]褪黑素受体基因1B单核苷酸多态性与妊娠糖尿病相关性研究[J]. 祁娟,胡光明,王婕.  中国医药导报. 2013(03)



本文编号：3019495