HPV16 E6/E7基因稳定沉默及cyclinD1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、凋亡及其相关周期因子的影响

发布时间：2021-03-02 01:04

　　子宫颈癌是女性最常见恶性肿瘤之一,高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染是其发生发展的必要条件。HPV16是主要的致癌病毒亚型,其早期调控蛋白E6/E7在宫颈上皮恶性转化过程中具有重要作用。本研究通过构建小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）介导的HPV16E6/E7基因稳定沉默细胞株,探讨了E6/E7癌基因对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、凋亡及相关周期因子的影响;通过构建cyclinD1基因真核表达载体,转染SiHa细胞,初步研究了cyclin D1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖及相关周期因子的影响。首先设计siRNA序列,构建E6/E7shRNA质粒转染SiHa细胞,G418筛选、鉴定,获得E6/E7基因稳定沉默细胞株cm-16,设立空质粒细胞株B3为空白对照。利用QT-PCR和RT-PCR分别检测SiHa/B3/cm-16细胞E6/E7基因mRNA的表达水平、Western blot检测SiHa/B3/cm-16细胞E6/E7蛋白的表达。检测得到cm-16细胞E6/E7基因沉默效率分别为89%、82%,确定shRNA序列可随质粒载体整合至SiHa细胞基... 

【文章来源】：河北北方学院河北省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

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前言
实验一 shRNA介导的HPV16 E6/E7基因稳定沉默对宫颈鳞癌SiHa增殖及凋亡的影响
    材料与方法
    结果
实验二 E6/E7基因稳定沉默后对宫颈癌SiHa细胞相关周期因子的影响
    材料与方法
    结果
实验三 cyclinD1在宫颈上皮内瘤变及鳞状细胞癌中的表达特征及HPVE7相关性研究
    材料和方法
    结果
实验四 cyclinD1质粒构建及过表达后对子宫颈癌SiHa细胞增殖的影响
    材料和方法
    结果
实验五 cyclinD1过表达对子宫颈鳞癌SiHa周期相关因子的影响
    材料与方法
    结果
附图
附表
讨论
结论
参考文献
综述 基因沉默技术的研究进展及应用现状
    参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3058304