MAGE-A3基因对宫颈癌细胞增殖及凋亡的作用研究
发布时间：2021-03-04 23:32
研究背景宫颈癌（Cervical cancer,CC）在世界各地癌症相关死亡的原因中排名第四位,它是全世界妇女癌症相关死亡的主要原因之一。尽管宫颈癌的治疗方案包括放疗、化疗和手术等已取得了很大的进展,但由于复发和转移,宫颈癌患者的5年生存率仍然不高。因此,需要开发新的诊断和治疗策略,以期减少复发,提高生存率。黑色素瘤相关抗原A3（Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3）基因是一种癌症睾丸抗原（Cancer-testis Antigen,CTA）基因,其表达在多种恶性肿瘤中得到证实,包括黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肺癌和胰腺癌等。近年来研究表明,MAGE-A3在许多肿瘤类型中的异常表达与不良的临床结局相关。但有关MAGE-A3在宫颈癌中的作用研究较少。为了研究MAGE-A3与宫颈癌的关系,本课题组前期研究通过实时荧光定量PCR、蛋白印迹法和免疫组化的方法,检测了MAGE-A3在正常宫颈组织与宫颈癌组织的表达差异,结果表明,MAGE-A3在宫颈癌组织中的表达明显高于正常组,且其表达水平与宫颈癌的临床分期,病理分级,淋巴转移呈正相关趋势。进一步在宫...
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR检测MAGE-A3在宫颈癌细胞中mRNA的表达：四种宫颈癌细胞株中，Hela细胞中MAGE-A3的mRNA表达水平最高，Siha细胞表达水平最低
河北大学硕士学位论文16中Hela细胞中MAGE-A3蛋白表达最高，Siha细胞表达最低（图1-2）。qRT-PCR和WB检测四种宫颈癌细胞系中MAGE-A3的表达，均显示Hela中表达高，Siha中表达低，故后续研究选择Hela细胞作为MAGE-A3基因沉默实验对象，Siha细胞作为MAGE-A3基因过表达实验对象。图1-2Westernblot检测MAGE-A3在宫颈癌细胞中蛋白的表达：A：四种细胞蛋白电泳条带，B：灰度值分析：Hela细胞中MAGE-A3蛋白表达最高，Siha细胞表达最低。Figure1-2ResultsofWesternblot:MAGE-A3proteinexpressionincervicalcancercells.2.2构建MAGE-A3过表达宫颈癌细胞株应用稳定转染的方法，通过MAGE-A3过表达慢病毒（Lv-MAGEA3）及空载慢病毒阴性对照（Lv-NC）分别转染Siha细胞，转染后48h开始嘌呤霉素药筛，药筛获得稳定转染细胞株后，应用qRT-PCR和Westernblot检测基因过表达效果。如图1-3所示，根据qRT-PCR结果（表1-1，图1-3A），MAGE-A3基因mRNA在Siha细胞空白对照组（Blank）、慢病毒阴性对照组（Lv-NC）及MAGE-A3过表达组（Lv-MAGEA3）中的相对表达量分别为1.05±0.04、1.10±0.15、8.05±0.89。LV-MAGEA3组的mRNA相对表达量较Blank组升高7.13±0.16倍。WB结果（表1-2，图1-3B）示MAGE-A3蛋白在上述三组中的相对表达量分别为0.88±0.12、1.03±0.17、1.66±0.17。以上结果表明Siha细胞转染MAGE-A3过表达慢病毒后，Lv-MAGEA3组的MAGE-A3mRNA和蛋白相对表达量均明显高于Blank和Lv-NC组，P值均＜0.05，差异有统计学意义。而Blank和Lv-NC组中MAGE-A3的mRNA和蛋白表达无明显差异。说明Lv-MAGEA3转染Siha细胞可显著上调MAGE-A3的表达。表1-1qRT-PCR检测MAGE-A3在各组Siha细胞中mRNA相对表达量（±S）。
第一章MAGE-A3基因过表达及沉默的宫颈癌细胞株的构建与鉴定17Table1-1TherelativeexpressionlevelofMAGE-A3mRNAineachgroupofSihacells.分组MAGE-A3t值P值Siha-Blank1.05±0.04Siha-Lv-NC1.10±0.15t=0.56vs.BlankP=0.61vs.BlankSiha-Lv-MAGEA38.05±0.89t=13.61**vs.Blankt=13.34**vs.Lv-NCP=0.00vs.BlankP=0.00vs.Lv-NC注：**P＜0.01。表1-2WB检测MAGE-A3在各组Siha细胞中蛋白相对表达量（±S）。Table1-2TherelativeexpressionlevelofMAGE-A3proteinineachgroupofSihacells.分组MAGE-A3t值P值Siha-Blank0.88±0.12Siha-Lv-NC1.03±0.17t=1.265vs.BlankP=0.66vs.BlankSiha-Lv-MAGEA31.66±0.17t=7.14**vs.Blankt=5.87*vs.Lv-NCP=0.00vs.BlankP=0.01vs.Lv-NC注：*P＜0.05，**P＜0.01。图1-3qRT-PCR（A）和WB（B）检测MAGE-A3在Siha细胞中的过表达效果，*P＜0.05，**P＜0.01。
【参考文献】：
期刊论文
[1]人黑色素瘤抗原A3在宫颈癌组织和细胞中的表达研究[J]. 石若冰,王琰,何海鹏,李青,马英,梁义娟,刘金,齐冀,高新萍. 安徽医科大学学报. 2019(11)
[2]临床肿瘤免疫治疗研究进展[J]. 毛建平,陈立军. 国际药学研究杂志. 2013(02)
[3]MAGE-A1/A3蛋白在胶质瘤的表达及意义[J]. 杨静,廖红,陈纡. 现代免疫学. 2011(05)
[4]KAP-1:转录调控中的一个桥梁分子[J]. 杨冬,姜颖,贺福初. 遗传. 2007(02)
[5]肿瘤相关抗原MAGE-A3的研究进展[J]. 黎皓,刘炳亚. 中国癌症杂志. 2006(07)
[6]细胞周期调控与肿瘤[J]. 邹向阳,李连宏. 国际遗传学杂志. 2006(01)
[7]MAGE-A和NY-ESO-1的表达与子宫颈癌临床病理特征及预后关系探讨[J]. 杨碧辉,梁利斌. 浙江临床医学. 2013 (08)
硕士论文
[1]黑色素瘤相关抗原-A3、-A9在宫颈病变的表达及临床意义[D]. 何海鹏.河北大学 2017
[2]宫颈癌组织及细胞株中MAGE、BAGE、GAGE基因表达的研究[D]. 石琰.山东大学 2006
本文编号：3064137
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR检测MAGE-A3在宫颈癌细胞中mRNA的表达：四种宫颈癌细胞株中，Hela细胞中MAGE-A3的mRNA表达水平最高，Siha细胞表达水平最低
河北大学硕士学位论文16中Hela细胞中MAGE-A3蛋白表达最高，Siha细胞表达最低（图1-2）。qRT-PCR和WB检测四种宫颈癌细胞系中MAGE-A3的表达，均显示Hela中表达高，Siha中表达低，故后续研究选择Hela细胞作为MAGE-A3基因沉默实验对象，Siha细胞作为MAGE-A3基因过表达实验对象。图1-2Westernblot检测MAGE-A3在宫颈癌细胞中蛋白的表达：A：四种细胞蛋白电泳条带，B：灰度值分析：Hela细胞中MAGE-A3蛋白表达最高，Siha细胞表达最低。Figure1-2ResultsofWesternblot:MAGE-A3proteinexpressionincervicalcancercells.2.2构建MAGE-A3过表达宫颈癌细胞株应用稳定转染的方法，通过MAGE-A3过表达慢病毒（Lv-MAGEA3）及空载慢病毒阴性对照（Lv-NC）分别转染Siha细胞，转染后48h开始嘌呤霉素药筛，药筛获得稳定转染细胞株后，应用qRT-PCR和Westernblot检测基因过表达效果。如图1-3所示，根据qRT-PCR结果（表1-1，图1-3A），MAGE-A3基因mRNA在Siha细胞空白对照组（Blank）、慢病毒阴性对照组（Lv-NC）及MAGE-A3过表达组（Lv-MAGEA3）中的相对表达量分别为1.05±0.04、1.10±0.15、8.05±0.89。LV-MAGEA3组的mRNA相对表达量较Blank组升高7.13±0.16倍。WB结果（表1-2，图1-3B）示MAGE-A3蛋白在上述三组中的相对表达量分别为0.88±0.12、1.03±0.17、1.66±0.17。以上结果表明Siha细胞转染MAGE-A3过表达慢病毒后，Lv-MAGEA3组的MAGE-A3mRNA和蛋白相对表达量均明显高于Blank和Lv-NC组，P值均＜0.05，差异有统计学意义。而Blank和Lv-NC组中MAGE-A3的mRNA和蛋白表达无明显差异。说明Lv-MAGEA3转染Siha细胞可显著上调MAGE-A3的表达。表1-1qRT-PCR检测MAGE-A3在各组Siha细胞中mRNA相对表达量（±S）。
第一章MAGE-A3基因过表达及沉默的宫颈癌细胞株的构建与鉴定17Table1-1TherelativeexpressionlevelofMAGE-A3mRNAineachgroupofSihacells.分组MAGE-A3t值P值Siha-Blank1.05±0.04Siha-Lv-NC1.10±0.15t=0.56vs.BlankP=0.61vs.BlankSiha-Lv-MAGEA38.05±0.89t=13.61**vs.Blankt=13.34**vs.Lv-NCP=0.00vs.BlankP=0.00vs.Lv-NC注：**P＜0.01。表1-2WB检测MAGE-A3在各组Siha细胞中蛋白相对表达量（±S）。Table1-2TherelativeexpressionlevelofMAGE-A3proteinineachgroupofSihacells.分组MAGE-A3t值P值Siha-Blank0.88±0.12Siha-Lv-NC1.03±0.17t=1.265vs.BlankP=0.66vs.BlankSiha-Lv-MAGEA31.66±0.17t=7.14**vs.Blankt=5.87*vs.Lv-NCP=0.00vs.BlankP=0.01vs.Lv-NC注：*P＜0.05，**P＜0.01。图1-3qRT-PCR（A）和WB（B）检测MAGE-A3在Siha细胞中的过表达效果，*P＜0.05，**P＜0.01。
【参考文献】：
期刊论文
[1]人黑色素瘤抗原A3在宫颈癌组织和细胞中的表达研究[J]. 石若冰,王琰,何海鹏,李青,马英,梁义娟,刘金,齐冀,高新萍. 安徽医科大学学报. 2019(11)
[2]临床肿瘤免疫治疗研究进展[J]. 毛建平,陈立军. 国际药学研究杂志. 2013(02)
[3]MAGE-A1/A3蛋白在胶质瘤的表达及意义[J]. 杨静,廖红,陈纡. 现代免疫学. 2011(05)
[4]KAP-1:转录调控中的一个桥梁分子[J]. 杨冬,姜颖,贺福初. 遗传. 2007(02)
[5]肿瘤相关抗原MAGE-A3的研究进展[J]. 黎皓,刘炳亚. 中国癌症杂志. 2006(07)
[6]细胞周期调控与肿瘤[J]. 邹向阳,李连宏. 国际遗传学杂志. 2006(01)
[7]MAGE-A和NY-ESO-1的表达与子宫颈癌临床病理特征及预后关系探讨[J]. 杨碧辉,梁利斌. 浙江临床医学. 2013 (08)
硕士论文
[1]黑色素瘤相关抗原-A3、-A9在宫颈病变的表达及临床意义[D]. 何海鹏.河北大学 2017
[2]宫颈癌组织及细胞株中MAGE、BAGE、GAGE基因表达的研究[D]. 石琰.山东大学 2006
本文编号：3064137
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