NCK1通过Rac1-PAK1-MMP2信号途径促进宫颈鳞癌微血管生成
发布时间：2021-03-09 12:11
目的:探讨非催化区域酪氨酸激酶衔接蛋白1（Nck1）在宫颈鳞状细胞癌（CSCC）的血管生成中的作用及其分子机制。方法:采用免疫组织化学和免疫印迹法分别检测CSCC标本和癌细胞中蛋白的表达。用CD34内皮标记结合Weinner计数法检测癌组织微血管密度（MVD）。用实时定量PCR检测癌细胞mRNA水平。分别通过表达质粒pCMV2-Nck1和Nck1-siRNA转染子宫颈鳞癌细胞获得Nck1基因过表达（SiHa-Nck1+）和基因沉默（SiHa-Nck1-）的细胞株。利用ELISA检测细胞上清液蛋白质水平。分别通过CCK-8细胞活力测定,transwell小室细胞迁移实验和体外Matrigel管腔实验分别检测人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的增殖、迁移和管腔形成能力。结果:Nck1的表达水平在正常宫颈上皮组织和低级别宫颈上皮内瘤变至高级别宫颈上皮内瘤变中逐渐升高。在宫颈鳞癌组织中Nck1的表达水平显著高于高级别上皮内瘤变,且Nck1的表达与宫颈鳞癌微血管密度正相关。与正常SiHa上清液处理后的HUVECs相比,SiHa-Nck1+上清液处理后的内皮细胞的增殖能力、迁移能力和管腔形成能力显着...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
用来自具有不同Nck1水平的SiHa细胞的上清液刺激的HUVECs的增殖，迁移和管腔形成
由于 Nck1 调节癌细胞的血管生成诱导能力，它可能改变癌细胞中一些下游分泌性血管生成分子的表达。因此，我们评估了具有不同 Nck1 表达水平的癌细胞中一些常见血管生成分子的变化，包括 VEGF 和 MMP2。结果，我们发现在SiHa 细胞、SiHa-Nck+和 SiHa-Nck-之间 VEGF 的表达水平没有明显改变如图3.3A。 SiHa-Nck +和 SiHa-Nck-的 MMP2 表达水平明显高于（1.374±0.163，p <0.05）和低于（0.238±0.026，p < 0.05）SiHa 细胞（0.970±0.176，图 3.3A）。结果表明 Nck1 可上调 SiHa 细胞中 MMP2 的表达。为进一步证实 Nck1 对 MMP2表达的影响，用 ELISA 检测细胞上清液 MMP2 含量，结果发现，SiHa-Nck1+的上清液 MMP2 水平（951.53±66.88 pg，p < 0.05）和 SiHa-Nck1-上清液中 MMP2的水平（652.47±56.96 pg，p < 0.05）分别显着高于和低于 SiHa 细胞（757.77±19.30pg）（图 3.3 B-C）。为了进一步确认 MMP2 的促内皮血管生成功能，使用人工重组 MMP2 蛋白直接刺激 HUVECs。如图 3.3D-F 所示，随着 MMP2 浓度的增加，内皮细胞增殖率，迁移能力和管腔形成能力增加。这些结果暗示 Nck1 介导的 MMP2 上调可能是 Nck1 增强宫颈鳞癌细胞血管诱生能力的原因。
图 3.4 Rac1 / PAK1 信号通路在 Nck1 介导的 MMP2 上调和 Nck1 诱导的血管生成中的作用A，SiHa-Nck1+中的 Rac1-GTP，p-PAK 和 MMP2 水平显着高于 SiHa 细胞对照组， 而SiHa-Nck1-低于 SiHa 细胞对照组（SiHa-Nck1+ vs 对照，p = 0.045，p < 0.001 和 p = 0.025；SiHa-Nck1- vs 对照，p = 0.047， p = 0.008 和 p = 0.004）。 SiHa-Nck1+用 NSC23766 处理（SiHa-Nck1 ++NSC23766）中Rac1-GTP，p-PAK1和MMP2的水平明显低于其在SiHa-Nck+中的水平（SiHa-Nck1++NSC23766 vs SiHa-Nck1+，p = 0.003，p = 0.002 和 p = 0.012）。 B，用 PAK1 特异性抑制剂（SiHa-Nck1++IPA-3）预处理的 SiHa-Nck1+中 p-PAK1 和 MMP2 的水平显着低于 SiHa-Nck1+（SiHa-Nck1++ IPA-3 vs SiHa-Nck1+ ，p < 0.001 和 p = 0.006）。C，用来自 SiHa-Nck1+（H-Nck1+）的上清液刺激的 HUVEC 与具有 Rac1 抑制剂处理的SiHa-Nck1+（H-Nck1+-NSC23766）和具有 PAK 抑制的 SiHa-Nck1+（H-Nck1+-IPA3）的增殖速率的比较（ *，H-Nck1+-NSC23766 vs H-Nck1+，p = 0.01； ＃，H-Nck1+-IPA-3 vsH-Nck1+，p = 0.018）。 D，H-Nck1+的迁移。 E，H-Nck1+-NSC23766 的迁移。 F，H-Nck1+-IPA-3 的迁移。 G，H-Nck1+-NSC23766 和 H-Nck1+-IPA-3 的迁移能力显着低于H-Nck1+。 *，H-Nck1+-NSC23766 vs H-Nck1+，p = 0.02； ＃，H-Nck1+-IPA-3 vs H-Nck1+，p = 0.01。 H，H-Nck1+的管腔形成。 I，H-Nck1+-NSC23766 的管腔形成。 J，H-Nck1+-IPA-3的管腔形成。 K，H-Nck1+-NSC23766 和 H-Nck1+-IPA-3 的管形成能力明显低于 H-Nck1+。*，H-Nck1+ -NSC23766 vs H-Nck1+，p = 0.07； ＃，H-Nck1+-IPA-3 vs H-Nck1+，p = 0.032。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He. Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
[2]Incidence and mortality of cervical cancer in China,2013[J]. Bingbing Song,Chao Ding,Wangyang Chen,Huixin Sun,Maoxiang Zhang,Wanqing Chen. Chinese Journal of Cancer Research. 2017(06)
本文编号：3072829
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
用来自具有不同Nck1水平的SiHa细胞的上清液刺激的HUVECs的增殖，迁移和管腔形成
由于 Nck1 调节癌细胞的血管生成诱导能力，它可能改变癌细胞中一些下游分泌性血管生成分子的表达。因此，我们评估了具有不同 Nck1 表达水平的癌细胞中一些常见血管生成分子的变化，包括 VEGF 和 MMP2。结果，我们发现在SiHa 细胞、SiHa-Nck+和 SiHa-Nck-之间 VEGF 的表达水平没有明显改变如图3.3A。 SiHa-Nck +和 SiHa-Nck-的 MMP2 表达水平明显高于（1.374±0.163，p <0.05）和低于（0.238±0.026，p < 0.05）SiHa 细胞（0.970±0.176，图 3.3A）。结果表明 Nck1 可上调 SiHa 细胞中 MMP2 的表达。为进一步证实 Nck1 对 MMP2表达的影响，用 ELISA 检测细胞上清液 MMP2 含量，结果发现，SiHa-Nck1+的上清液 MMP2 水平（951.53±66.88 pg，p < 0.05）和 SiHa-Nck1-上清液中 MMP2的水平（652.47±56.96 pg，p < 0.05）分别显着高于和低于 SiHa 细胞（757.77±19.30pg）（图 3.3 B-C）。为了进一步确认 MMP2 的促内皮血管生成功能，使用人工重组 MMP2 蛋白直接刺激 HUVECs。如图 3.3D-F 所示，随着 MMP2 浓度的增加，内皮细胞增殖率，迁移能力和管腔形成能力增加。这些结果暗示 Nck1 介导的 MMP2 上调可能是 Nck1 增强宫颈鳞癌细胞血管诱生能力的原因。
图 3.4 Rac1 / PAK1 信号通路在 Nck1 介导的 MMP2 上调和 Nck1 诱导的血管生成中的作用A，SiHa-Nck1+中的 Rac1-GTP，p-PAK 和 MMP2 水平显着高于 SiHa 细胞对照组， 而SiHa-Nck1-低于 SiHa 细胞对照组（SiHa-Nck1+ vs 对照，p = 0.045，p < 0.001 和 p = 0.025；SiHa-Nck1- vs 对照，p = 0.047， p = 0.008 和 p = 0.004）。 SiHa-Nck1+用 NSC23766 处理（SiHa-Nck1 ++NSC23766）中Rac1-GTP，p-PAK1和MMP2的水平明显低于其在SiHa-Nck+中的水平（SiHa-Nck1++NSC23766 vs SiHa-Nck1+，p = 0.003，p = 0.002 和 p = 0.012）。 B，用 PAK1 特异性抑制剂（SiHa-Nck1++IPA-3）预处理的 SiHa-Nck1+中 p-PAK1 和 MMP2 的水平显着低于 SiHa-Nck1+（SiHa-Nck1++ IPA-3 vs SiHa-Nck1+ ，p < 0.001 和 p = 0.006）。C，用来自 SiHa-Nck1+（H-Nck1+）的上清液刺激的 HUVEC 与具有 Rac1 抑制剂处理的SiHa-Nck1+（H-Nck1+-NSC23766）和具有 PAK 抑制的 SiHa-Nck1+（H-Nck1+-IPA3）的增殖速率的比较（ *，H-Nck1+-NSC23766 vs H-Nck1+，p = 0.01； ＃，H-Nck1+-IPA-3 vsH-Nck1+，p = 0.018）。 D，H-Nck1+的迁移。 E，H-Nck1+-NSC23766 的迁移。 F，H-Nck1+-IPA-3 的迁移。 G，H-Nck1+-NSC23766 和 H-Nck1+-IPA-3 的迁移能力显着低于H-Nck1+。 *，H-Nck1+-NSC23766 vs H-Nck1+，p = 0.02； ＃，H-Nck1+-IPA-3 vs H-Nck1+，p = 0.01。 H，H-Nck1+的管腔形成。 I，H-Nck1+-NSC23766 的管腔形成。 J，H-Nck1+-IPA-3的管腔形成。 K，H-Nck1+-NSC23766 和 H-Nck1+-IPA-3 的管形成能力明显低于 H-Nck1+。*，H-Nck1+ -NSC23766 vs H-Nck1+，p = 0.07； ＃，H-Nck1+-IPA-3 vs H-Nck1+，p = 0.032。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He. Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
[2]Incidence and mortality of cervical cancer in China,2013[J]. Bingbing Song,Chao Ding,Wangyang Chen,Huixin Sun,Maoxiang Zhang,Wanqing Chen. Chinese Journal of Cancer Research. 2017(06)
本文编号：3072829
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