促排卵对小鼠卵巢印迹基因H19DMR区甲基化状态的影响

发布时间：2017-04-16 17:04

  本文关键词：促排卵对小鼠卵巢印迹基因H19DMR区甲基化状态的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：与传统的遗传定律不同,表观遗传学在不改变基因碱基序列的情况下,改变了基因的表达。而引起基因表达发生改变的影响被称为表观遗传修饰。DNA甲基化与基因组印迹(Genomic Imprinting)均属于表观遗传学的范畴之列。某些基因表现为不表达或表达极弱,而另一等位基因呈亲源依赖性的单等位基因表达,称为基因组印迹,仿佛这些基因带有某种可识别的印迹,是不同亲本来源的一对等位基因。因此具有这一现象的基因就称为印迹基因(Imprinted Gene)。表观遗传机制主要是指在基因印迹擦除、重建或维持过程中出现DNA甲基化/组蛋白修饰改变,然而DNA序列并没有发生改变,只造成印迹基因表达的异常。在配子形成和胚胎的构建及生长发育的过程中,基因印迹可出现表观遗传学变化,进行印迹擦除和重建,在体细胞分裂过程中维持。这一机制中任何一个环节出现错误都有可能引起胚胎发育缺陷,甚至造成胚胎的死亡。目前关于ART子代印迹疾病的报道,主要提示表观遗传改变引起的异常所致。然而,由ART技术引起子代出现印迹疾病,其发生机制尚未明确,目前主要认为可能与父母自身的生育能力、促排卵、体外受精、卵细胞浆单精子注射等多种因素有关。H19基因是目前研究较多的印迹基因,位于小鼠7号染色体末端区域,人染色体11p15.5。人类H19基因总长3 489 bp,不翻译成蛋白质,只表达RNA。很多研究发现H19基因印迹的改变与辅助生殖技术子代的安全性相关。目的:本实验主要研究促排卵对小鼠卵巢印迹基因H19差异性甲基化区域(DMR)甲基化状态的影响。方法:将实验分为两组,分别为实验组和对照组。所有实验小鼠均为清洁系初情期雌性昆明系小白鼠,每组20只。实验组小鼠使用孕马血清促性腺刺激素(PMSG)促排卵,对照组小鼠在情动周期腹腔注射生理盐水。对获得的所有小鼠卵巢组织提取全基因组DNA,经亚硫酸盐变性修饰,使得非甲基化状态的碱基C转变成碱基U,然而甲基化的碱基C不变,经PCR扩增出目的片段,然后进行克隆测序分析印迹基因H19 DMR区甲基化状态的改变情况。结果:经亚硫酸盐变性修饰及克隆测序分析,对照组小鼠卵巢基因组DNA中H19 DMR区高甲基化比例为50.31%±7.98%,实验组小鼠卵巢基因组DNA中H19DMR区高甲基化比例为30.94%±8.72%。实验组与对照组相比,存在明显的甲基化丢失(P0.05)。结论:本实验研究提示,促排卵可引起了小鼠卵巢印迹基因H19 DMR区的甲基化丢失。
【关键词】：小鼠 卵巢 印迹基因 H19 促排卵
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.6
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-16
• 内容与方法16-25
• 1. 实验材料16-17
• 2. 实验方法17-24
• 3. 统计分析24-25
• 结果25-29
• 讨论29-38
• 结论38-39
• 参考文献39-44
• 综述44-61
• 综述参考文献53-61
• 作者简介及读研期间主要科研成果61-63
• 致谢63

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