M1型巨噬细胞源外泌体增强卵泡膜细胞的活力

发布时间：2021-04-24 03:44

　　目的:探讨M1型巨噬细胞源外泌体对卵泡膜细胞活力的影响及其作用机制。方法:采用脂多糖（LPS）处理Raw264.7小鼠巨噬细胞,构建M1型巨噬细胞模型及巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体系。超速离心法分离巨噬细胞分泌的外泌体;通过电镜、Western blot和纳米流式检测仪鉴定外泌体。体外分离培养小鼠卵泡膜细胞,与PKH67荧光标记的外泌体共孵育,观察卵泡膜细胞摄取外泌体的情况。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞周期分布,q PCR及Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B（CDKN1B）的表达。结果:在巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体系中,LPS诱导的M1型巨噬细胞通过外泌体增强卵泡膜细胞活力。电镜、Western blot及纳米流式检测结果显示,巨噬细胞源外泌体被成功分离。PKH67标记的外泌体与卵泡膜细胞共孵育实验证实卵泡膜细胞能摄取大量巨噬细胞源外泌体。这些外泌体可增强卵泡膜细胞的活力,使卵泡膜细胞G₀/G₁期比例下降,S期比例升高,且卵泡膜细胞CDKN1B的m RNA及蛋白相对表达量均明显低于对照组。结论:卵... 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材料和方法
    1 动物
    2 主要试剂和仪器
    3 主要方法
        3.1 巨噬细胞培养
        3.2 卵泡膜细胞的提取、培养和鉴定
        3.3 巨噬细胞与卵泡膜细胞共培养
        3.4 Raw264.7巨噬细胞外泌体的提取
        3.5 Raw264.7巨噬细胞外泌体的鉴定
        3.6 实验分组
        3.7 外泌体荧光标记示踪
        3.8 CCK-8法检测细胞活力
        3.9 流式细胞术检测细胞周期分布
        3.1 0 qPCR实验
        3.1 1 Western blot实验
    4 统计学处理
结果
    1小鼠卵泡膜细胞培养及鉴定
    2 M1型巨噬细胞对卵泡膜细胞细胞活力的影响
    3巨噬细胞来源外泌体的鉴定
    4 巨噬细胞分泌的外泌体能被卵泡膜细胞摄取
    6 M1型巨噬细胞源外泌体对卵泡膜细胞的细胞周期分布和CDKN1B表达的影响
5 M1型巨噬细胞源外泌体对卵泡膜细胞活力的影响
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]骨髓间充质干细胞来源的外泌体用于大鼠脊髓损伤修复的初步探索[J]. 王琳,裴双,郭斌,路雁惠,李燕飞,段冉冉,姚要兵,陈雪梅,贾延劼.  中国病理生理杂志. 2018(05)
[2]小檗碱增强表柔比星诱导T24细胞G0/G1期阻滞的作用机制[J]. 詹雄宇,陈奇彪,吕秀秀,秦晓平,陈建帆,黄保元,黄君,卓育敏.  中国病理生理杂志. 2017(06)
[3]PCOS患者卵泡液微环境中的亚急性炎症反应[J]. 杨星,黄睿,梁晓燕.  中国病理生理杂志. 2015(09)



本文编号：3156607