甲状腺激素缺乏母鼠后代脑发育中microRNAs的异常表达及其分子机制的实验研究

发布时间：2021-04-29 18:21

　　目的:甲状腺激素（TH）在脑发育过程中具有极其重要的作用。先天性甲状腺功能减退或者妊娠期母体甲状腺激素不足,都会不同程度地影响胎儿神经细胞的增殖、分化、迁移、突触的发育、髓鞘的形成及功能的完善。亚临床甲状腺功能减退症（Subclinical hypothyroidism,SH）又称亚临床甲减。Man发现轻微的母亲甲减就可引起后代智力评分降低,本课题组的流行病学研究结果提示妊娠中期妇女单纯亚临床甲减、单纯低T₄血症和单纯TPOAb阳性皆可以使后代智力和运动发育评分下降。动物实验研究提示亚临床甲减母鼠可导致后代学习和记忆能力的下降。母鼠孕13天之前开始左旋T₄治疗能够阻止神经细胞迁移及结构定位破坏,并且可纠正这些蛋白含量的改变。但是母体亚临床甲减引起后代神经发育的确切机制还不清楚。研究证明了许多受TH调节且参与脑发育的靶分子,并且发现甲状腺功能减退症（甲减）动物模型中这些靶分子的mRNA表达低于正常动物。TH是在分子水平控制着大脑发育。TH反应性基因对TH的反应性及其mRNA和蛋白的表达有时间依赖性和组织特异性,由此推测在TH调节脑发育的过程中应... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:亚临床甲减母鼠的胎/仔鼠脑发育过程中microRNA的差异性表达
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂
        2.2 实验分组及处理
            2.2.1 实验动物分组
            2.2.2 实验动物处理
        2.3 大鼠血清甲状腺功能测定
        2.4 miRNA芯片检测
            2.4.1 总RNA抽提
            2.4.2 RNA的纯度鉴定以及含的测定
            2.4.3 靶标制备
        2.5 芯片结果分析
        2.6 实时定量PCR
            2.6.1 miRNAs实时定量PCR检测
            2.6.2 靶基因实时定量PCR检测
        2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 孕鼠血清TSH及TT4水平比较
        3.2 亚临床甲减组与正常组相比表达差异的miRNA芯片图谱
        3.3 甲减组与亚临床甲减组相比表达差异的miRNA芯片图谱
        3.4 亚临床甲减与正常组相比表达差异的miRNAs实时定量验证
        3.5 差异表达的miRNA靶基因实时定量验证
        3.6 差异表达的miRNAs靶基因GO和KEGGpathway分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分:miR-125b-5p在甲减母鼠后代脑组织的表达及在去甲状腺素培养的C17.2神经干细胞中的作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 细胞系:HEK293、C17.2
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
            2.1.5 主要溶液及试剂的配置
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物造模及标本制备
            2.2.2 甲减母鼠miRNA芯片检测
            2.2.3 Real time PCR检测miR-125b-5p及靶基因STAT3 mRNA表达
            2.2.4 Western blot检测各组胎鼠脑组织STAT3蛋白表达
            2.2.5 pMIR-GLO-STAT3质粒构建
            2.2.6 HEK293细胞的培养、转染、萤光素酶检测
            2.2.7 C17.2神经干细胞培养、鉴定及转染
            2.2.8 转染后细胞miR-125b-5p、STAT3、TUBB3、GFAP mRNA实时定量检测
            2.2.9 STAT3总蛋白磷酸化蛋白检测
            2.2.10 转染后细胞CCK-8检测增殖
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 甲减母鼠E13天仔鼠芯片结果
        3.2 甲减母鼠后代miR-125b-5p和STAT3 mRNA表达量
        3.3 甲减母鼠后代STAT3总蛋白检测结果
        3.4 质粒结果
        3.5 萤光素酶检测结果
        3.6 C17.2神经干细胞鉴定
        3.7 阴离子交换树脂对血清中甲状腺激素清除影响
        3.8 正常组和去甲状腺激素培养C17.2细胞转染miR-125b-5p mimics STAT3 mRNA表达量检测
        3.9 C17.2细胞转然后STAT3总蛋白和磷酸化蛋白结果
        3.10 去甲状腺激素培养C17.2神经干细胞分化变化
        3.11 转染miR-125b-5p mimics对细胞分化的影响
        3.12 去甲状腺激素培养对C17.2神经干细胞增殖的影响
        3.13 转染miR-125b-5p mimics对C17.2增殖影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响[J]. 贾丛伟,孙洋,张婷婷,卢朝辉,陈杰.  中国医学科学院学报. 2016(04)



本文编号：3167947