骨髓间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导的卵巢损伤大鼠卵巢功能的影响

发布时间：2017-04-20 04:08

  本文关键词：骨髓间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导的卵巢损伤大鼠卵巢功能的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本文主要探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对环磷酰胺(CTX)诱导的大鼠卵巢损伤的影响。方法:采用CTX连续腹腔注射(首负荷50mg/kg,之后按10mg/kg.d连续腹腔注射14天)诱导大鼠卵巢损伤,每日8时取阴道脱落细胞检查,观察大鼠动情周期变化来建立卵巢损伤模型。取出生14天的SD大鼠的骨髓进行原代培养BMSC,传代扩增及鉴定,获取第3-6代细胞进行移植。将要进行实验的大鼠分成为三个组。包括空白对照组,模型组及细胞移植组。空白对照组的处理方法是每次应用生理盐水1ml进行腹腔注射,每天注射一次,共用15天。模型组:于第一天给予负荷剂量CTX腹腔注射,即50mg/kg溶于1ml生理盐水中,之后按10mg/kg.d溶于1ml生理盐水中,继续给药14天。细胞移植组按模型组给药方法,但在第一天给药后24小时左右给予尾静脉移植BMSC,移植细胞量约为5×106/0.5ml。在停止给药后1周处死所有动物。心脏取血后采用放射免疫法检测血清E2,FSH及LH水平,收集各组卵巢组织进行检测。结果:(1)与空白对照组对比,模型组和细胞移植组的雌二醇(E2)均下降(P0.05),黄体生成素(LH)均升高(P0.05),模型组卵泡刺激素(FSH)升高(P0.05),但细胞移植组的FSH无明显改变(P0.05);与模型组对比,细胞移植组的E2显著升高,FSH及LH显著下降(P0.05);(2)与空白对照组比较,模型组及细胞移植组总卵泡数量下降(P0.05),以中大卵泡数下降为主(P0.05),但是细胞移植组总卵泡数及中大卵泡数较模型组显著增加(P0.05),(3)卵巢组织TUNEL法检测模型组及细胞移植组AI较空白对照组增加(P0.05),但是细胞移植组AI较模型组显著下降(P0.05);(4)免疫组织化学法检测发现卵泡颗粒细胞胞质中存在Bax及Bcl-2蛋白表达,空白对照组的卵泡颗粒细胞胞质中散在表达Bax蛋白;模型组卵泡颗粒细胞质中Bax蛋白的表达显著增加,尤其是在闭锁卵泡中;细胞移植组卵泡颗粒细胞胞质中Bax蛋白的表达范围明显小于模型组。空白对照组Bcl-2蛋白在卵泡颗粒细胞胞质中表达显著,模型组Bcl-2蛋白在卵泡颗粒细胞胞质中很散在表达,细胞移植组Bcl-2蛋白表达范围明显大于模型组;(5)免疫印记法进行半定量检测结果提示模型组及细胞移植组较空白对照组的卵巢组织Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达量显著下降(P0.05);但是细胞移植组较模型组的Bax蛋白表达量显著下降(P0.05),Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论:通过本研究,我们发现经尾静脉移植BMSC入化疗大鼠体内,在一定程度上减轻了大鼠卵巢损伤,进一步通过免疫组织化学法及Western-Blot法检测卵泡颗粒细胞凋亡蛋白结果提示BMSC移植可能通过调节卵泡颗粒细胞中Bax及Bcl-2蛋白表达水平来减轻CTX诱导的卵巢损伤。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 环磷酰胺 卵巢早衰 卵巢损伤 细胞凋亡
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.75
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 文献回顾13-23
• 第一部分 CTX诱导的卵巢损伤大鼠模型的建立23-28
• 1 材料23
• 2 方法23-27
• 3 结果27
• 4 小结27-28
• 第二部分 BMSC原代培养，扩增及鉴定28-35
• 1 材料28-29
• 2 方法29-32
• 3 结果32-34
• 4 小结34-35
• 第三部分 BMSC移植对CTX诱导的卵巢损伤大鼠卵巢功能的影响35-53
• 1 材料35-37
• 2 方法37-43
• 3 统计分析43
• 4 结果43-49
• 5 讨论49-53
• 小结53-55
• 参考文献55-67
• 个人简历和研究成果67-68
• 致谢68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Effects of Local Testicular Heating on Bcl-2 and Bax Protein Expression in Spermatogenic Cells in Rats[J];Journal of Reproduction and Contraception;2005年01期

  本文关键词：骨髓间充质干细胞移植对环磷酰胺诱导的卵巢损伤大鼠卵巢功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：317850