人脂肪源性干细胞对卵巢癌SK-OV-3细胞的作用及其机制研究

发布时间：2021-05-16 10:28

　　目的:卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,是女性生殖系统肿瘤中死亡率最高的肿瘤。大多数患者就诊时已是晚期,51%的患者为FIGO III期、29%的患者为FIGO IV期,而Ⅲ、Ⅳ期患者5年生存率仅为27%。肿瘤转移是影响卵巢癌患者生存率的主要因素。肿瘤细胞生长依赖于肿瘤微环境。研究发现,肿瘤细胞可以募集包括间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）在内的细胞进入肿瘤微环境发挥作用。脂肪源性干细胞（adipose derived stem cell,ADSC）是间充质干细胞家族的重要成员,ADSC已被证明参与多种肿瘤细胞的恶性进程,例如乳腺癌、肺癌、骨肉瘤、胶质细胞瘤、前列腺癌等。有报道ADSC通过旁分泌方式影响Wnt信号通路增强结肠癌细胞的转移能力。因此,本研究提取人ADSC制备条件培养基（conditioned medium,CM）培养卵巢癌SK-OV-3细胞,模拟其在肿瘤微环境中的作用,观察并研究肿瘤特性变化,探索ADSC在卵巢癌发展中的作用及其潜在机制,为卵巢癌的治疗提供新方向。研究方法:1.ADSC的分离、培养及鉴定。（1）运用胶原酶消化法提取网膜脂肪组... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 溶液配置
3 实验方法
    3.1 细胞培养
        3.1.1 细胞复苏
        3.1.2 细胞传代
        3.1.3 细胞冻存
    3.2 ADSC的分离培养及鉴定
        3.2.1 原代细胞分离培养
        3.2.2 ADSC细胞表型鉴定
        3.2.3 ADSC体外成脂诱导分化鉴定
        3.2.4 ADSC体外成骨诱导分化鉴定
        3.2.5 制备ADSC条件培养基
    3.3 CCK-8法检测细胞增殖
    3.4 PI染色法检测细胞周期
    3.5 Annexin-V/PI荧光双染法检测细胞凋亡
    3.6 Wound healing实验检测细胞迁移
    3.7 Transwell迁移实验
    3.8 Transwell侵袭实验
    3.9 RT-PCR实验
        3.9.1 细胞总RNA提取
        3.9.2 PCR引物设计及扩增
    3.10 Western Blot实验
        3.10.1 细胞总蛋白提取
        3.10.2 SDS PAGE凝胶电泳
    3.11 细胞免疫荧光实验
    3.12 RNA干扰
    3.13 XAV-939处理
    3.14 统计学分析
4 结果
    4.1 人脂肪源性干细胞(ADSC)的表征
    4.2 ADSC促进卵巢癌SK-OV-3细胞增殖并抑制其凋亡
    4.3 ADSC促进卵巢癌SK-OV-3细胞的迁移和侵袭
    4.4 ADSC促进卵巢癌SK-OV-3细胞上皮间质转化
    4.5 ADSC促进卵巢癌SK-OV-3细胞中SALL4的表达并激活Wnt/β-catenin信号通路
5 讨论
6 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3189527