5-氮杂-2-脱氧胞苷提高子宫内膜癌KLE细胞株对醋酸甲羟孕酮的药物敏感性研究

发布时间：2021-05-21 01:05

　　目的:研究DNMT抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷提高KLE细胞对孕激素类药物醋酸甲羟孕酮的药物敏感性,并初步探究5-氮杂-2-脱氧胞苷在细胞内的作用方式及其可能机制,进而为临床上孕激素治疗子宫内膜癌不理想的患者提供新的治疗思路与理论依据。方法:首先提取正常人和子宫内膜癌患者的组织DNA为模板,对其用亚硫酸氢钠进行甲基化修饰,设计甲基化特异性PCR的实验方案,从引物量,模板量,退火温度、循环数方面,确定甲基化特异性PCR对DNA甲基化检测的最佳条件。然后在最佳检测条件下对正常人以及子宫内膜癌患者组织进行DNA甲基化情况的检测。体外培养子宫内膜癌细胞株KLE与Ishikawa,用DNMT抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷处理细胞株后,检测细胞用药前后的DNA甲基化情况以及孕激素受体B的蛋白表达情况,并确定最佳的药物浓度与药物处理时间。联合应用DNMT抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷与孕激素类药物醋酸甲羟孕酮处理KLE细胞株,观察联合用药对于子宫内膜癌细胞的抑制率。荧光定量PCR检测用药前后细胞内DNA甲基转移酶的mRNA表达情况。结果:1、利用甲基化特异性PCR技术成功检测了子宫内膜癌患者以及健康人群... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 主要仪器
    2.2 主要试剂
    2.3 相关试剂盒
第3章 实验方法
    3.1 主要溶液的配制
    3.2 引物设计
    3.3 样本采集
    3.4 DNA甲基化的检测
    3.5 细胞培养
    3.6 ADC处理KLE细胞前后DNA甲基化情况
    3.7 Western Blot检测ADC处理后PRB蛋白的表达
    3.8 MTT法检测药物处理后对KLE细胞系增殖的影响
    3.9 荧光定量PCR检测药物处理前后KLE细胞DNMT的 mRNA表达
第4章 实验结果
    4.1 组织样本DNA甲基化的检测及分析
    4.2 ADC处理KLE和 Ishikawa细胞前后的DNA甲基化情况检测
    4.3 Western Blot检测药物处理KLE细胞前后PRB的蛋白表达情况
    4.4 MTT法检测不同药物处理KLE细胞后的细胞增殖情况
    4.5 荧光定量PCR检测药物处理前后KLE细胞DNMT的 mRNA表达情况
第5章 实验讨论
第6章 实验结论
参考文献
综述
    参考文献
研究生期间科研成果
致谢



本文编号：3198762