距离-温度联合的新型筛选法提高人精子质量的效果分析

发布时间：2021-06-05 06:17

　　目的探讨基于精子前向运动性和温度趋向性的新型筛选方法在提高人精子质量的效果。方法将密度梯度离心后获能的精子置于不同长度（2、5和8 cm）条状液滴的一端,同时设置不同的环境温度条件（恒温32℃、恒温37℃、32℃～37℃温度梯度）,孵育60 min后,从液滴的另一端收集精子样本,比较不同距离及温度条件下筛选获得精子的浓度、活力、正常形态率及DNA碎片率等指标的差异。结果在相同的环境温度条件下,经过长距离（5、8 cm）筛选获得的精子比初始精子（0 cm）具有更高的正常形态率（P<0.05）;随着距离的延长,精子活力未见显著性改变,但精子的浓度则呈极显著下降趋势（P<0.01）。长距离（5、8 cm）条件下,32℃～37℃温度梯度环境获得的精子浓度高于无温度差值组（恒温32℃和恒温37℃）（P<0.01）,且精子DNA碎片率更低（P<0.05）。结论长距离水平游动能淘汰大量形态异常的精子,但过长的距离将导致精子浓度急剧下降,温度梯度的设置能富集得到更多DNA完整性较好的具有正常趋热应答能力的精子。5 cm,32℃～37℃条件下优选精子效果较好,可降低体外受精过程中... 

【文章来源】：基础医学与临床. 2020,40(08)CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

不同距离-温度联合筛选条件下精子DNA碎片率的比较

选取直径为100 mm的培养皿,用记号笔在圆皿外底面标记不同长度(2、5和8 cm)的刻度线,再用加样器吸取恒定液体量(500 μL)的G-GAMETE培养液并沿背面刻度线加注并拉出宽度相同的条状液滴,最后在液滴表面覆盖石蜡油。将恒温培养箱温度分别设置为32 ℃和37 ℃,将装有条状液滴的培养皿分别放入不同温度的培养箱内。其中,32 ℃培养箱中部分培养皿底部一侧垫有37 ℃恒温电热片,保证皿内3条液滴的右侧对齐并位于电热片导热区的正上方,同时使用微滴温度检测仪对培养皿中条状液滴的不同区段进行温度测定,以验证形成32 ℃～37 ℃的温度梯度(图1)。培养液均需在箱中平衡4 h以上,从而形成A1(2 cm,32 ℃)、A2(5 cm,32 ℃)、A3(8 cm,32 ℃)、B1(2 cm,37 ℃)、B2(5 cm,37 ℃)、B3(8 cm,37 ℃)、C1(2 cm,32 ℃～37 ℃)、C2(5 cm,32 ℃～37 ℃)、C3(8 cm,32 ℃～37 ℃)9组不同的距离-温度联合筛选条件。将离心后的获能精子分成体积相等(50 μL)的10份,留存1份作为初始样本I组(0 cm,37 ℃),其余9份添加到各条状液滴的一端,孵育60 min后,从液滴的另一端收集精子样本进行后续实验。1.2.3 精子浓度、活力的测定:

在进行距离-温度联合筛选之前,使用密度梯度离心法处理后得到的获能精子,其活动精子百分率(PR+NP)显著性高于精液原液的活动精子百分率(P<0.01)。32 ℃、37 ℃、32 ℃～37 ℃条件下,随着距离的延长,精子活力无明显提高(图2)。2.3 精子形态正常率的比较

【参考文献】：
期刊论文
[1]人类体外受精-胚胎移植实验室操作专家共识（2016）[J]. Embryologist Group,China Society of Reproduction Medicine,Chinese Medical Association;.  生殖医学杂志. 2017(01)



本文编号：3211612