沉默单羧酸转运体4抑制宫颈癌的增殖、侵袭迁移并促进其凋亡
发布时间：2021-06-06 21:06
背景宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,近年来发病率有逐渐上升的趋势,在亚洲人群中有着较高的发病率。在我国,宫颈癌日益成为威胁女性生命健康的严重问题。宫颈癌致死的主要原因是部分患者在确诊时已经达到晚期,并且在治疗过程中对放疗、化疗产生耐受和抵抗,甚至产生转移,因此亟需寻找一种新的治疗方法。肿瘤细胞对于葡萄糖的利用优先选择有氧糖酵解的方式进行代谢,即Warburg效应,这将导致葡萄糖的消耗增加,产生大量的乳酸,另外,肿瘤细胞异常利用谷氨酰胺也会导致乳酸的生成增加。这些能量代谢途径都导致细胞内乳酸含量增加,为避免酸中毒,肿瘤细胞通过膜蛋白将乳酸外排入其微环境,造成微环境的酸化,而这将促进肿瘤多种恶性生物学行为的产生,包括组织侵袭、转移,新生血管生成和对缺氧的反应,此外,乳酸诱导酸化的肿瘤微环境（pH 6.0—6.5）可抑制宿主局部抗癌免疫力。已经有越来越多的证据表明靶向肿瘤能量代谢重编程可以为肿瘤治疗提供一种有效的治疗方法。单羧酸转运体（Monocarboxylate transporters,MCTs）家族包括了参与乳酸和其他单羧酸盐转运的质膜蛋白,而MCT4是其中重要的一员。通常认为乳酸/H+...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
westernblot检测MCT4蛋白在Hcer-Epic、Hela、Siha细胞中的表达水平
2.2 筛选出沉默 MCT4 适宜浓度的 siRNA为了达到更好的沉默效果并避免脱靶效应，我们设计了两条 siRNA，即siMCT4#1、siMCT4#2（序列详见表 1）。为了筛选出适宜的转染浓度，将siMCT4#1、siMCT4#2 分别以 50 nM、100 nM、150 nM、200 nM 和 300 nM 瞬时转染 Hela、Siha 细胞。如图 2.1 所示，48h 后，Western blot 结果显示内参蛋白 β-actin 条带灰度值较为一致，Hela 组中空白对照组（Ctrl）和阴性对照组（siNC）条带灰度值相比无显著差异（P＞0.05），随着转染 siRNA#1 浓度的增加，MCT4 蛋白条带的灰度值逐渐减小，但 200 nM 组和 300 nM 组 MCT4 条带灰度值无明显差异。同样，如图 2.2 所示，siRNA#2 沉默 MCT4 基因时，随着转染浓度从 50 nM 到 300 nM的增加，MCT4 条带灰度值逐渐减小。在 Siha 组(如图 2.3、2.4)中也呈现出与Hela 类似的沉默效果。由此可见，在一定范围内（50 nM--300 nM），随着转染浓度的增加，沉默效果逐渐增强，但 200 nM 组和 300 nM 组未见明显差异。为达到较好的沉默效果并减少 Lipo3000 对细胞的毒性，两条序列 siRNA#1、siRNA#2 都选用 200 nM 的浓度来进行后续实验。
westernblot检测不同浓度的siMCT4#2沉默Hela细胞中MCT4的效果
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mechanisms of regulation of PFKFB expression in pancreatic and gastric cancer cells[J]. Oleksandr H Minchenko,Katsuya Tsuchihara,Dmytro O Minchenko,Andreas Bikfalvi,Hiroyasu Esumi. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
本文编号：3215142
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
westernblot检测MCT4蛋白在Hcer-Epic、Hela、Siha细胞中的表达水平
2.2 筛选出沉默 MCT4 适宜浓度的 siRNA为了达到更好的沉默效果并避免脱靶效应，我们设计了两条 siRNA，即siMCT4#1、siMCT4#2（序列详见表 1）。为了筛选出适宜的转染浓度，将siMCT4#1、siMCT4#2 分别以 50 nM、100 nM、150 nM、200 nM 和 300 nM 瞬时转染 Hela、Siha 细胞。如图 2.1 所示，48h 后，Western blot 结果显示内参蛋白 β-actin 条带灰度值较为一致，Hela 组中空白对照组（Ctrl）和阴性对照组（siNC）条带灰度值相比无显著差异（P＞0.05），随着转染 siRNA#1 浓度的增加，MCT4 蛋白条带的灰度值逐渐减小，但 200 nM 组和 300 nM 组 MCT4 条带灰度值无明显差异。同样，如图 2.2 所示，siRNA#2 沉默 MCT4 基因时，随着转染浓度从 50 nM 到 300 nM的增加，MCT4 条带灰度值逐渐减小。在 Siha 组(如图 2.3、2.4)中也呈现出与Hela 类似的沉默效果。由此可见，在一定范围内（50 nM--300 nM），随着转染浓度的增加，沉默效果逐渐增强，但 200 nM 组和 300 nM 组未见明显差异。为达到较好的沉默效果并减少 Lipo3000 对细胞的毒性，两条序列 siRNA#1、siRNA#2 都选用 200 nM 的浓度来进行后续实验。
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Mechanisms of regulation of PFKFB expression in pancreatic and gastric cancer cells[J]. Oleksandr H Minchenko,Katsuya Tsuchihara,Dmytro O Minchenko,Andreas Bikfalvi,Hiroyasu Esumi. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
本文编号：3215142
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