ALDH1作为宫颈癌干细胞标志物的实验研究

发布时间：2017-04-23 09:02

  本文关键词：ALDH1作为宫颈癌干细胞标志物的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究宫颈癌中ALDH1作为CCSCs标志物的可能性,以及SP与ALDH1联合筛选CCSCs的可行性。研究方法1.利用流式分选技术获得宫颈癌Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞的ALDH1high和ALDH1low细胞。2.采用无血清悬浮培养实验观察ALDH1high和ALDH1low细胞的自我更新能力。3.采用软琼脂克隆实验验证ALDH1high和ALDH1low细胞的增殖能力。4.采用反转录-聚合酶链式反应(Real-Time PCR)技术检测宫颈癌原代细胞ALDH1high和ALDH1low细胞中相关干性基因表达情况。5.利用流式分选技术将宫颈癌原代细胞进行SP及ALDH1联合筛选,以判定两者分选出的细胞亚群间的相互关系。结果1.经流式分选技术检测,宫颈癌Si Ha细胞株中ALDH1high细胞比例为(0.77±0.25)%(n=6),宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞比例为(3.13±0.85)%(n=6)。2.无血清悬浮培养实验结果显示,Si Ha细胞株中ALDH1high细胞的成球率为(12.91±3.94)%,明显高于ALDH1low细胞的成球率(5.83±0.96)%,(n=4,P0.05);宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞的成球率为(22.92±2.84)%,也明显高于ALDH1low细胞的成球率(8.33±4.90)%,(n=4,P0.05)。3.软琼脂克隆形成实验结果显示,Si Ha细胞株中ALDH1high细胞的克隆形成数为(26.17±7.63)/200 cells,明显高于ALDH1low细胞的克隆形成数(12.83±2.56)/200 cells,(n=6,P0.05);宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞的克隆形成数(55.00±8.67)/200 cells,也明显高于ALDH1low细胞的克隆形成数(23.67±3.93)/200 cells,(n=6,P0.05)。4.Real-Time PCR检测宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞的CD24和CD44表达量分别是ALDH1low细胞的(2.23±0.33)倍和(1.87±0.12)倍(n=3,P0.05);而ALDH1high细胞的Nanog及Oct4的表达分别是ALDH1low细胞的(1.41±0.27)倍和(1.49±0.20)倍,(n=3,P0.05)。5.宫颈癌原代细胞的SP细胞中ALDH1high细胞的比例为0.75%,而NSP细胞中ALDH1high细胞比例为5.87%,SP和ALDH1high两个细胞亚群不重叠。结论1.Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞亚群自我更新及增殖能力均高于ALDH1low细胞亚群;2.Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞亚群中干性基因表达高于ALDH1low细胞亚群;3.ALDH1可富集CCSCs,但分离纯度不够,不能单独作为CCSCs分选的标志物;4.SP和ALDH1不能作为联合筛选CCSCs的方法。
【关键词】：ALDH1 肿瘤干细胞 宫颈癌 肿瘤干细胞标志物 SP
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-12
• 英文缩略词12-13
• 第1章 引言13-15
• 第2章 综述15-22
• 2.1 宫颈癌干细胞标志物15-19
• 2.1.1 细胞角质素类15-16
• 2.1.2 ABCG216-17
• 2.1.3 ALDH117
• 2.1.4 转录因子类17-18
• 2.1.5 细胞黏附分子类18-19
• 2.2 宫颈癌干细胞的分离方法19-20
• 2.2.1 侧群细胞分选法19
• 2.2.2 悬浮球培养法19-20
• 2.2.3 免疫学分选法20
• 2.3 结语20-22
• 第3章 材料与方法22-28
• 3.1 材料22-24
• 3.1.1 细胞株及耗材22
• 3.1.2 主要试剂22-23
• 3.1.3 主要仪器23
• 3.1.4 主要试剂配制23-24
• 3.2 实验方法24-28
• 3.2.1 Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞的ALDH1流式分选24
• 3.2.2 无血清悬浮培养实验24-25
• 3.2.3 软琼脂克隆形成实验25
• 3.2.4 Real-Time PCR技术检测干性基因25-27
• 3.2.5 SP细胞中检测ALDH1high比例27
• 3.2.6 统计分析27-28
• 第4章 结果28-36
• 4.1 Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞比例28
• 4.2 ALDH1high自我更新能力强于ALDH1low细胞28-30
• 4.3 ALDH1high细胞增殖能力强于ALDH1low细胞30-32
• 4.4 原代细胞ALDH1high和ALDH1low细胞干性基因比较32-34
• 4.5 宫颈癌原代细胞中SP细胞的ALDH1high细胞比例34-36
• 第5章 讨论36-40
• 5.1 ALDH1亚群细胞的分选及其自我更新及增殖能力研究36-37
• 5.2 ALDH1high和ALDH1low细胞干性基因表达37-39
• 5.3 SP和ALDH1联合筛选CCSCs39-40
• 第6章 结论40-41
• 参考文献41-48
• 作者简介48-49
• 致谢49

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本文编号：322115