PFOA通过激活ERK/mTOR通路促进子宫内膜癌侵袭转移

发布时间：2021-06-21 14:59

　　目的:全氟辛酸（PFOA）是一种化学合成物,是环境中的持续污染物。由于其耐水且不易分解,近来广泛应用于手工业品制造,并发现其广泛存在于环境包括饮用水中。PFOA与多种疾病有关,包括多种肿瘤相关疾病。然而,PFOA暴露是否与子宫内膜癌的发生发展有关及其分子机制现尚无研究报道。上皮间质化（EMT）促进肿瘤细胞增殖及侵袭。细胞表面分子标记物如E-cadherin的下调是肿瘤细胞发生EMT并侵袭转移的关键步骤。本研究探讨了PFOA促进子宫内膜癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:体外培养子宫内膜癌Ishikawa及ECC-1细胞（RPMI-1640）,MTT及Transwell实验方法检测50nMPFOA,ERK1/2抑制剂 U0126（10μM）+PFOA,mTOR通路抑制剂rapamycin（浓度为250nM）+PFOA分别作用不同时间后对细胞增殖及侵袭作用的影响;并采用western blot,免疫荧光,RT-PCR等方法探究PFOA促进细胞侵袭能力增强的机制;将Ishikawa细胞种植于6周龄裸鼠,随机分为对照组,PFOA实验组,PFOA+ rapamycin实验组,从而检测移植瘤的大小;w... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１：?ＰＦＯＡ促进人Ｉｓｈｉｋａｗａ子宫内膜癌细胞的迁移及侵袭．Ａ．分别用０，１，５，１０，５０，??１００，１５０?ｎＭ浓度的ＰＦＯＡ处理细胞４８小时后ＭＴＴ法评估细胞增殖

记物Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ及间质细胞标记物Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达。正如我们所想，实验显??示，与对照组相比，邱０Ａ组Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达在ｍＲＮＡ及蛋白水平均显著下调（如??图２Ａ，２Ｂ所示）。而且，与对照組相比，免疫巧光实验显示Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达显??著下降（如图２Ｃ所示）。此外，尽管ＰＦＯＡ组间质上皮细胞标记物Ｖｉｍｅｎｔｉｎ在??ｍＲＮＡ及蛋白水平均捏度上升，但无统计学意义。Ｗ上结果均显示在人子宫内膜??癌细胞中，ＰＦＯＡ作用后可能会促进ＥＭＴ发生。??？?＊??２８??

?南京医科大学博－上学位论文??同时ＰＦＯＡ并未改变ＲＰ％的总体水平（如图３Ａ所示）；这表明ＰＦＯＡ激活了ｍＴＯＲ??通路的下游启动子ＲＰＳ６。经文献查询发现：ＥＭＴ现象中ＰＤＫ／ＡＫＴ及ＥＲＫ均可??能激活参与调节ＲＰ％的表达［４７，气因此，为检验是否ＰＦＯＡ激活了?Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞??中的这两种信号通路，我们检测了ＡＫＴ及ＥＲＫ１／２的磯酸化水平。结果显示；??ＰＦＯＡ处理３，６，或２４小时后，并未观察到ＡＫＴ或ＥＲＫ１／２礎酸化水平改变（如??图３Ａ所示）。于是，我们缩短的ＰＦＯＡ作用的时间，进一步检测ＡＫＴ或ＥＲＫ１／２磯??酸化水平改变。结果发现，ＰＦＯＡ作用Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞仅仅１５分钟时，ＥＲＫ１／２的??磯酸化尤其是ＥＲＫ２的稱酸化就被激活；而在ＰＦＯＡ刺激细胞１小时左右磯酸化??水平则逐渐下降与对照组一致（如图３Ｂ所示）。即短暂暴露于ＰＦＯＡ后，Ｉｓｈｉｋａｗａ??细胞中ＥＲＫ１／２被激活，其磯酸化水平短暂性升高。相反，我们观察到在ＰＦＯＡ处??理后的２４小时内

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3240888