HPV16 E6、IL-28B在真核表达载体的构建及糖酵解抑制剂抗宫颈癌作用的研究

发布时间：2021-06-27 19:59

　　第一部分HPV16 E6、IL-28B基因在真核表达载体的构建目的:应用克隆技术将人乳头瘤病毒16的E6、IL-28B基因序列构建于真核表达载体毕赤酵母系统上,进一步筛选和优化,用甲醇诱导表达其蛋白,为宫颈癌的免疫治疗提供基础。方法:在geneback库中找到E6和IL-28B的cDNA序列,实验室前期构建在原核表达载体的E6及IL-28B与基因库查找序列一致。购买Ppic-9k-his质粒,公司提供序列与基因库中比对结果一致,选择EcoRⅠ和NoTⅠ酶切位点,用primer软件设计引物,PCR等分子克隆技术将E6及IL-28B的cDNA序列构建在真核表达载体质粒pPIC9K-his上,转化GS115宿主菌,用G418抗生素筛选出高拷贝菌,优化表达条件。结果:通过分子克隆技术成功构建了毕赤酵母表达载体Ppic9k-his-E6、pPIC9K-his-IL-28B,通过G418筛选出多拷贝转化子,通过优化不同的诱导表达条件,摸索了外源基因IL-28B、E6在毕赤酵母受体细胞的表达,其诱导条件需要进一步的改进,为进一步研究宫颈癌免疫治疗和治疗性疫苗做了准备。结论:成功构建了pPIC9K-h... 

【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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图1-1分子克隆实验流程图

37℃、30 min，在 65℃水浴锅中灭活 10min。 重组质粒 Ppic9k-his-E6、Ppic9k-his-IL-28B 的电转化Ppic9k-his-E6、Ppic9k-his-IL-28B 重组质粒在超净台中取出 5ul，置于提前GS115 感受态细胞中，将其放置在冰水混合物中。将预冷的 Ppic9k-his-E6、Ppic9k-his-IL-28B 重组质粒和酵母感受态细胞混杯中，电转仪操作流程及参数设置如图 1-2 所示：试剂 E6 线性化体系 IL-28B 线性化体系ddH20 12 ul 12 ul10xH buffer 2 ul 2 ulsacⅠ - 2 ulsalⅠ 2 ul -重组质粒 4 ul 4 ul

酵母载体结构图


本文编号：3253512