稳定敲降NF-YB基因HeLa细胞系的构建

发布时间：2021-07-30 06:28

　　目的:利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术,构建稳定敲降NF-YB基因的HeLa细胞系。方法:设计shRNA-NF-YB引物,利用分子克隆技术构建H1/GFP-Puro-shRNA-NF-YB质粒,转染293T后收集病毒感染HeLa细胞;用嘌呤霉素筛选细胞得到稳定敲降细胞株;利用Western blot和实时荧光定量PCR对细胞系进行鉴定。结果:构建的质粒经测序后与设计的引物对比序列一致,Western blot和实时荧光定量PCR结果表明构建细胞的NF-YB蛋白和mRNA表达抑制效果明显。结论:本实验成功构建了NF-YB-shRNA-HeLa细胞系,获得了特异性NF-YB基因敲降的HeLa细胞。 

【文章来源】：癌变·畸变·突变. 2020,32(06)

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【部分图文】：

靶序列测序结果

q PCR检测结果

RNA干扰技术被Jorgensen R发现报道，他在牵牛花中导入色素合成基因后，不仅想要的色素没有合成，插入的基因也没有表达，这种现象被称为共抑制[18]。直到Fire等[19]研究结果表明在导入了双链RNA后会导致目的基因的特异性沉默，才将其命名为RNA干扰。2002年RNA干扰技术被Science和Nature评为重大科技成果之一，它具有高效性、高特异性等特点[20]。短发夹RNA(shRNA)，包含一个Loop结构，可加工成siRNA，也可通过与目标mRNA互补结合序列特异性地实现靶mRNA降解。使用细菌或病毒载体，被导入靶细胞的细胞核内，在某些情况下，载体可以稳定地整合到基因组中。图3 q PCR检测结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]宫颈癌相关显著突变基因研究进展[J]. 傅培强,王伟,郝敏.  国际妇产科学杂志. 2020(01)
[2]不同分期宫颈癌患者采用彩色多普勒超声检测宫颈及肿块大小的临床研究[J]. 慕秋霞,阎菲.  山西医药杂志. 2019(24)
[3]中医药防治宫颈癌研究进展[J]. 马琳琳,何慧,高敬书,李威.  现代中西医结合杂志. 2019(32)
[4]人Cdc25B基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析[J]. 丁立新,赵现哲,姜晓燕,刘晓丹,周平坤,丁库克.  军事医学. 2018(04)
[5]辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系[J]. 赵现哲,刘晓丹,周平坤,姜晓燕,丁库克.  癌变·畸变·突变. 2017(06)
[6]宫颈癌辐射敏感性相关基因的研究进展[J]. 丁立新,赵现哲,姜晓燕,丁库克.  癌变·畸变·突变. 2017(05)
[7]RNA干扰技术的研究进展[J]. 张鑫,郝玉琴.  中国麻风皮肤病杂志. 2016(02)



本文编号：3310894