塞来昔布诱导卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用及其机制研究

发布时间：2017-04-27 23:14

  本文关键词：塞来昔布诱导卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景：卵巢癌是所有妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病。上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)患者占所有卵巢癌患者的90%[1]。由于多数上皮性卵巢癌在诊断时就已发展至晚期,即使联合手术与先进的化疗药物进行治疗,患者的五年生存率仍徘徊在30%左右[2]。上皮性卵巢癌患者高复发率和死亡率的主要原因是患者在诊断时就已经发生转移。网膜、腹膜、膈肌及肠系膜等处的转移已被证实是卵巢癌患者的不良预后因素[3]。因此阐明卵巢癌发生侵袭转移的机制在改善卵巢癌患者的诊断、治疗及预后有着重要的意义。已有大量研究证实,炎症参与了癌症的发生发展[4]。环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)是一种在炎症过程中诱导表达升高的酶,其主要作用是将花生四烯酸转化为前列腺素[5]。同时环氧化酶-2在人类上皮性癌症的侵袭、转移和上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal Transition, EMT)的发生中起关键作用[6-8]。这些研究均支持将选择性环氧化酶-2抑制剂,非甾体类抗炎药塞来昔布(Celecoxib)用于癌症的治疗。体外实验证实塞来昔布可以调控细胞周期,促进细胞凋亡和抑制血管生成[9]。在非小细胞肺癌、结直肠癌、口腔黏膜癌前病变及上皮性卵巢癌的治疗中,塞来昔布作为辅助用药已经进入临床试验阶段[10-13]。然而这些临床试验并未证实塞来昔布可以改善癌症患者的预后。尽管在一项针对45位复发性卵巢癌患者的临床研究中患者对塞来昔布的治疗反应较好,但是在另一项151位卵巢癌患者的临床研究中,塞来昔布联合多西紫杉醇和卡铂的治疗并未改善患者的无病生存期和总生存率[13,14]。可见塞来昔布在卵巢癌的治疗中存在争议,其中的机制需要进一步阐明。目的：1、研究塞来昔布作用于人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3后对细胞形态、细胞增殖和细胞侵袭性的影响；2、研究塞来昔布对卵巢癌细胞发生上皮间质转化的诱导作用,检测塞来昔布作用前后上皮间质转化相关蛋白的表达水平；3、探讨ZEB 1表达在塞来昔布诱导卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用,研究塞来昔布诱导卵巢癌细胞发生上皮间质转化的机制。方法：1、MTT法检测不同浓度塞来昔布(0,5,10,15 μM)对A2780和SKOV3的生长抑制作用；2、相差倒置显微镜观察塞来昔布(10 μM)对A2780和SKOV3细胞形态的改变并拍摄照片；3、Transwell侵袭小室检测塞来昔布(10 μM)对A2780和SKOV3细胞侵袭性的影响,在相差倒置显微镜下计数粘附于侵袭小室底部的细胞数；4、蛋白印迹法检测塞来昔布(0,5,10,15 μM)作用前后A2780和SKOV3细胞中上皮表型E-cadherin和Keratin、间质表型N-cadherin和Vimentin以及p-AKT、p-ERK和ZEB 1表达的变化；5、ZEB 1小干扰NRA (Small-interfering RNA, siRNA)作用于A2780和SKOV3细胞后再检塞来昔布对细胞的侵袭能力的影响和上皮间质转化的诱导作用。结果：1、塞来昔布对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究：应用MTT法检测不同浓度塞来昔布(0,5,10,15μM)作用于A2780和SKOV3细胞,48小时后检测塞来昔布对细胞的增殖的抑制情况,结果显示：与对照组相比,各浓度组均未对细胞的增殖有明显的抑制作用(P··0.05)。2、塞来昔布对卵巢癌细胞形态影响的研究：应用相差倒置显微镜观察塞来昔布(10μM)对细胞形态的改变,结果显示：A2780细胞的空白对照组细胞呈现较规则的小三角形的上皮细胞形态,而实验组的细胞则出现伸长呈现梭行改变；而本身形态就不规则的SKOV3细胞形态逐渐变得规则清晰,并伸展出较长触角。3、塞来昔布对卵巢癌细胞侵袭性影响的研究：应用Transwell侵袭小室检测塞来昔布(10μM)对A2780和SKOV3细胞侵袭性的改变,结果显示：与对照组相比较,实验组细胞的侵袭性明显增加(P ≤ 0.001)。4、塞来昔布诱导卵巢癌细胞发生上皮间质转化的机制的研究：应用蛋白免疫印迹方法检测塞来昔布(0,5,10,15gM)对A2780和SKOV3细胞上皮E-cadherin、Keratin和间质表型N-cadherin、Vimentin以及p-AKT、p-ERK和ZEB1表达的影响,结果显示：与对照组相比,实验组的_上皮表型E-cadherin和Keratin表达明显降低,而间质表型N-cadherin和Vimentin表达则明显升高,并且随着药物浓度的增加表型表达变化越明显；实验组p-AKT、p-ERK和ZEB1表达也随着药物浓度的增加逐渐增加。5、塞来昔布促进卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用机制的确认：在加入塞来昔布前应用ZEB1小干扰NRA (Small-interfering RNA, siRNA)预先干扰A2780和SKOV3细胞,结果显示：干扰掉ZEB1的细胞再加入塞来昔布(10μM)并不能增加细胞的侵袭性,也不能使细胞的上皮及间质的表型表达发生改变。结论：1.塞来昔布能够诱导细胞发生形态改变,使细胞逐渐变得细长呈现出间质样细胞的形态；能够明显增加卵巢癌细胞的侵袭性；2.塞来昔布能够明显促进人卵巢癌细胞发生上皮间质转化,且具有浓度依赖性；3.塞来昔布诱导人卵巢癌上皮细胞发生上皮间质转化是通过激活PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路上调上皮间质转化相关转录因子ZEB1表达的机制完成的。
【关键词】：塞来昔布 卵巢癌 上皮间质转化 ZEB1
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 符号说明12-14
• 前言14-17
• 材料与方法17-30
• 结果30-33
• 讨论33-36
• 结论36-37
• 附图37-43
• 参考文献43-50
• 致谢50-51
• 攻读学位期间发表论文51-52
• 附件52

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本文编号：331647