差速离心法分离培养人内膜腺上皮细胞及OPN/MMP9在细胞中的表达和意义

发布时间：2021-08-11 19:30

　　第一部分室温酶解结合差速离心法分离培养子宫内膜上皮细胞及评估目的：探索室温酶解消化结合改良式差速离心法在分离培养子宫内膜腺上皮细胞的可行性，为进一步探索子宫内膜药物干预时机的选择提供依据。方法:1.收集子宫腺肌症患者的子宫内膜标本,所得内膜分为两份，一份采用室温酶解结合改良式差速离心法（改良组）分离，一份采用37℃水浴消化结合筛网法（对照组）分离，并用光镜、免疫细胞化学图像分析进行细胞鉴定、纯度分析,分别比较两种方法分离培养子宫内膜腺上皮细胞的数目、纯度。2.应用光镜观察细胞形态学变化，应用四甲基偶氮哩法（MTT）测定细胞不同时间点的OD值，绘制生长曲线。结果:1．改良组每1g内膜组织可得到（9±1.7）×107/mL个腺上皮细胞，免疫细胞化学角蛋白表达阳性，纯度达(97.8±0.002%；对照组可得到（3.9±0.78）×107个腺上皮细胞，角蛋白表达阳性，纯度达(88.6±0.006%,改良组分离的腺上皮细胞数量和纯度均明显高于对照组（P＜0.05）。培养无一例发生污染。2．光镜下观察,两组EEC外观特征相似,细胞形态无差异，两组细胞生长周期有显著性差异，改良组细胞于15天开始衰退... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

子宫内膜上皮细胞不同时间生长形态

境变化对其影响不大，将体外分离培养的上皮细胞进行上述特异性标志分子免疫细胞化学染色，进行细胞鉴定以及观察原代培养的上皮细胞体外生长的情况。结果发现，原代培养的子宫内膜腺上皮细胞呈Cytokeratin阳性表达，EEC胞浆被均染成棕黄色，阴性对照则仅见胞核呈蓝色,胞浆阴性。采用免疫荧光方法对分离的细胞进一步鉴定，结果表明免疫荧光法阳性细胞的细胞质呈绿色,染色后,在荧光显微镜下阴性细胞的细胞质不显色。

原代培养的子宫内膜腺上皮细胞呈Cytokeratin阳性表达，EEC胞浆被均染成棕黄色，阴性对照则仅见胞核呈蓝色,胞浆阴性。采用免疫荧光方法对分离的细胞进一步鉴定，结果表明免疫荧光法阳性细胞的细胞质呈绿色,染色后,在荧光显微镜下阴性细胞的细胞质不显色。A：对照组 B：改良组图 1-2 子宫内膜腺上皮细胞第 5 天角蛋白细胞免疫化学鉴定 (×200)A B

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3336757