经血源性间充质干细胞来源外泌体治疗大鼠宫腔粘连的研究

发布时间：2021-08-21 19:14

　　目的:宫腔粘连常见于人工流产、自然流产刮宫术、产后感染及宫腔手术后,是我国妇女继发性不孕的第二大病因。间充质干细胞移植在损伤修复和疾病治疗方面应用广泛,其中经血源性间充质干细胞（menstrual blood-derived stromal cells,MenSCs）在具有间充质干细胞共性的同时,还具有获取容易、来源丰富以及低免疫原性的特点,在干细胞再生医学领域拥有广阔的发展前景。我们之前的研究结果已经证实了MenSCs对重度宫腔粘连患者以及大鼠宫腔粘连模型的治疗作用,在探究其治疗机制时,我们发现MenSCs可能通过其旁分泌发挥部分的治疗效应。为了进一步探索MenSCs的旁分泌作用,我们用MenSCs来源的外泌体（MenSCs-Exos）治疗大鼠宫腔粘连模型,以观察MenSCs-Exos的治疗效果,并探索其可能的作用机制。研究方法:超速离心法分离提取MenSCs无血清培养上清中的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒追踪分析（NTA）和western blot技术对其进行鉴定,Shotgun法对其进行测序分析;采用机械损伤法建立大鼠模型,造模后大鼠随机分为三组,分别注射PBS、MenSCs和M... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MenSCs的表面标志CD44、CD73、CD90、CD105阳性，CD34、CD45、CD38阴性

中国医科大学硕士学位论文133实验结果3.1MenSCs的培养和鉴定显微镜下观察结果显示，原代MenSCs集落在培养皿底贴壁生长，培养至第三代时，细胞大小均一，胞体向两端突起，呈纺锤形或梭形，MenSCs的集落呈旋涡状或辐射状（图3.1）。流式结果显示MenSCs阳性表达间充质干细胞表面标志CD44、CD73、CD90、CD105，阴性表达造血干细胞表面标志CD34、CD45、CD38，提示MenSCs属于间充质干细胞（图3.2）。图3.1MenSCs（A：原代，B：P3）细胞呈纺锤形或梭形图3.2MenSCs的表面标志CD44、CD73、CD90、CD105阳性，CD34、CD45、CD38阴性3.2MenSCs-Exos的分离和鉴定选择P3-P7的MenSCs，替换为不含血清的培养基继续培养24h后回收上清，上清过滤后利用超速离心法获得外泌体沉淀，沉淀用PBS溶液重悬后通过透射电镜、纳米颗粒追踪分析以及westernblot的方法鉴定MenSCs-Exos。纳米颗粒追踪分析结果显示，MenSCs-Exos的粒径大小介于30-150nm之间，与理论外泌体数值相符，粒径峰值为127nm（图3.3A）。透射电镜观察结果可见，MenSCs-Exos呈

MenSCs-Exos的鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3356180