长链非编码RNA-PVT1负性调控miR-195-5p影响子宫内膜癌干细胞生物学行为及其机制
发布时间：2021-09-15 12:42
目的:人子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统的恶性肿瘤之一。主要治疗方法为手术、放疗和药物（化学药物及激素）治疗。目前针对子宫内膜癌有效的靶向治疗仍是临床妇科医生亟待思考的问题,其分子机制也成为近几年的研究热点。本研究旨在研究长链非编码RNA PVT1能否调控子宫内膜癌干细胞（ECSCs）的恶性生物学行为,进一步深入分析可能的分子机制,即PVT1通过下调miR-195-5p进而促进FGFR1和FGF2的表达,促进ECSCs的恶性生物学行为。研究方法:首先应用Real-time PCR方法和荧光原位杂交方法检测PVT1和miR-195-5p在人子宫内膜癌组织中的表达,并分析其与子宫内膜癌临床病例参数之间的关系。然后,利用双荧光素酶基因报告系统检测PVT1和miR-195-5p的靶向结合作用和结合位点。培养人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1A和RL95-2。之后在本实验中利用无血清悬浮法提取出Ishikawa-ECSCs。应用流式细胞术、免疫荧光和Real-time PCR方法检测其对干细胞相关因子的表达。并通过CCK-8实验、EdU法检测ECSCs的增殖能力,应用Transwel...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
子宫内膜癌组织中PVT1的表达A：Real-timePCR方法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中PVT1表达水平；B：
图 3 PVT1 和 miR-195-5p在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析A：TCGA 数据库分析子宫内膜癌组织中 PVT1 和 miR-195-5p 表达的相关性Pearson 相关性分析 Real-time PCR 方法检测的 PVT1 和 miR-195-5p 在子宫内膜达情况。3.4 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-195-5p应用生物信息学软件 starBase v2.0，我们预测到 PVT1 存在 miR结合位点（图 4A），进一步我们应用了双荧光素酶基因报告系统检测pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p-NC 组相比，pmir-GLO-PVT1-WT+m组的荧光素酶活性水平降低，且 pmir-GLO-PVT1-Mut+miR-195-5p 组酶活性水平恢复，提示 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-14B）。
图 3 PVT1 和 miR-195-5p在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析A：TCGA 数据库分析子宫内膜癌组织中 PVT1 和 miR-195-5p 表达的相关性；B：利用Pearson 相关性分析 Real-time PCR 方法检测的 PVT1 和 miR-195-5p 在子宫内膜癌组织中表达情况。3.4 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-195-5p应用生物信息学软件 starBase v2.0，我们预测到 PVT1 存在 miR-195-5p 的结合位点（图 4A），进一步我们应用了双荧光素酶基因报告系统检测发现，与pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p-NC 组相比，pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p组的荧光素酶活性水平降低，且 pmir-GLO-PVT1-Mut+miR-195-5p 组的荧光素酶活性水平恢复，提示 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-195-5p（图4B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Research progress and prospects of markers for liver cancer stem cells[J]. Cheng-Pei Zhu,An-Qiang Wang,Hao-Hai Zhang,Xue-Shuai Wan,Xiao-Bo Yang,Shu-Guang Chen,Hai-Tao Zhao. World Journal of Gastroenterology. 2015(42)
[2]Characteristics of PVT1 and Its Roles in Diseases[J]. Li Wang,Jin-hua He,Ze-ping Han. Chinese Medical Sciences Journal. 2014(04)
[3]MicroRNAs as a potential prognostic factor in gastric cancer[J]. Baruch Brenner,Moshe B Hoshen,Ofer Purim,Miriam Ben David,Karin Ashkenazi,Gideon Marshak,Yulia Kundel,Ronen Brenner,Sara Morgenstern,Marisa Halpern,Nitzan Rosenfeld,Ayelet Chajut,Yaron Niv,Michal Kushnir. World Journal of Gastroenterology. 2011(35)
本文编号：3396100
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
子宫内膜癌组织中PVT1的表达A：Real-timePCR方法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中PVT1表达水平；B：
图 3 PVT1 和 miR-195-5p在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析A：TCGA 数据库分析子宫内膜癌组织中 PVT1 和 miR-195-5p 表达的相关性Pearson 相关性分析 Real-time PCR 方法检测的 PVT1 和 miR-195-5p 在子宫内膜达情况。3.4 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-195-5p应用生物信息学软件 starBase v2.0，我们预测到 PVT1 存在 miR结合位点（图 4A），进一步我们应用了双荧光素酶基因报告系统检测pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p-NC 组相比，pmir-GLO-PVT1-WT+m组的荧光素酶活性水平降低，且 pmir-GLO-PVT1-Mut+miR-195-5p 组酶活性水平恢复，提示 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-14B）。
图 3 PVT1 和 miR-195-5p在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析A：TCGA 数据库分析子宫内膜癌组织中 PVT1 和 miR-195-5p 表达的相关性；B：利用Pearson 相关性分析 Real-time PCR 方法检测的 PVT1 和 miR-195-5p 在子宫内膜癌组织中表达情况。3.4 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-195-5p应用生物信息学软件 starBase v2.0，我们预测到 PVT1 存在 miR-195-5p 的结合位点（图 4A），进一步我们应用了双荧光素酶基因报告系统检测发现，与pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p-NC 组相比，pmir-GLO-PVT1-WT+miR-195-5p组的荧光素酶活性水平降低，且 pmir-GLO-PVT1-Mut+miR-195-5p 组的荧光素酶活性水平恢复，提示 PVT1 通过预测的结合位点靶向结合 miR-195-5p（图4B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Research progress and prospects of markers for liver cancer stem cells[J]. Cheng-Pei Zhu,An-Qiang Wang,Hao-Hai Zhang,Xue-Shuai Wan,Xiao-Bo Yang,Shu-Guang Chen,Hai-Tao Zhao. World Journal of Gastroenterology. 2015(42)
[2]Characteristics of PVT1 and Its Roles in Diseases[J]. Li Wang,Jin-hua He,Ze-ping Han. Chinese Medical Sciences Journal. 2014(04)
[3]MicroRNAs as a potential prognostic factor in gastric cancer[J]. Baruch Brenner,Moshe B Hoshen,Ofer Purim,Miriam Ben David,Karin Ashkenazi,Gideon Marshak,Yulia Kundel,Ronen Brenner,Sara Morgenstern,Marisa Halpern,Nitzan Rosenfeld,Ayelet Chajut,Yaron Niv,Michal Kushnir. World Journal of Gastroenterology. 2011(35)
本文编号：3396100
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