miR-101通过调节p-ERK1/2蛋白表达对SKOV3/DDP细胞行为活性的影响
发布时间：2021-09-16 23:16
目的:探讨miR-101表达对上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP行为活性的影响及相关作用机制。方法:上调SKOV3/DDP细胞中miR-101表达水平。RT-PCR法检测SKOV3/DDP细胞中miR-101 mRNA表达水平,CCK-8检测SKOV3/DDP细胞的顺铂敏感性,划痕实验检测SKOV3/DDP细胞的迁移力,Transwell实验检测SKOV3/DDP细胞侵袭力,Annexin V-FITC/PI流式细胞实验检测SKOV3/DDP细胞凋亡率,Western blot法检测SKOV3/DDP细胞p-ERK1/2、波形蛋白（Vimentin）、钙粘蛋白E（E-cadherin）及Caspase-3蛋白表达水平。结果:与各对照组比较,miR-101组SKOV3/DDP细胞miR-101mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,顺铂敏感性明显增加,IC50显著降低（P<0.05）;划痕距离明显增宽（P<0.05）,透膜细胞数显著减少（P<0.05）;细胞凋亡率显著增高（P<0.05）,p-ERK1/2及Vimentin蛋白表达水平降低（P<0...
【文章来源】：现代妇产科进展. 2017,26(08)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
各组SKOV3/DDP细胞miＲ-101相对表达量*P＜0．05vs阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组
ANOVA)，两两比较采用SNK检验。P＜0．05为差异有统计学意义。2结果2．1miＲ-101转染效果细胞转染24h后，miＲ-101组miＲ-101mＲNA表达量较各对照组显著增高(F=470．41，P＜0．05)。表明转染成功，且转染效率较高。见图1。2．2miＲ-101对SKOV3/DDP细胞顺铂敏感性的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞的顺铂IC50(34．78±3．39)与阴性对照组(60．97±1．09)、脂质体组(58．09±2．67)、空白质粒组(55．76±4．11)分别比较，差异均有统计学意义(F=43．75，P＜0．05);miＲ-101组SKOV3/DDP细胞的顺铂IC50明显降低。见图2。2．3miＲ-101对SKOV3/DDP细胞迁移力的影响miＲ-101组划痕24、48h划痕距离显著宽于各对照组(P＜0．05);阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组SKOV3/DDP细胞的划痕距离分别比较，差异均无统计学意义(P＞0．05)。见表1。2．4miＲ-101对SKOV3/DDP细胞侵袭力的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞透膜数量(158．67±9．71)与阴性对照组(235．00±12．00)、转染试剂组(241．67±10．50)、空白质粒组(235．33±13．58)比较，差异均有统计学意义(F=37．75，P＜0．05)。见图3。2．5miＲ-101对SKOV3/DDP细胞p-EＲK1/2、Vim-entin及E-cadherin蛋白表达水平的影响与阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组比较，miＲ-101组SKOV3/DDP细胞中p-EＲK1/2、Vimentin蛋白表达水平显著降低，E-cadherin蛋白表达显著增高，差异均有统计学意义(P＜0．05)。见表2、图4。图1各组SKOV3/DDP细胞miＲ-101相对表达量*P＜0．05vs阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组图2不同浓度顺铂作用下各组SKOV3/DDP细胞存活率*P＜0．05vs阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组表1SKOV3/DDP细胞划痕距离比较(x珋±s)组别划痕距离(μm)0h24h48h阴性对
图3各组SKOV3/DDP细胞侵袭情况A:阴性对照组;B:转染试剂组;C:空白质粒组;D:miＲ-101组图4各组SKOV3/DDP细胞Vimentin、E-cadherin及p-EＲK1/2表蛋白达水平2．6miＲ-101对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞凋亡率(23．06±1．58)较各对照组明显显著增加(F=218．04，P＜0．05);阴性对照组(10．15±0．36)、转染试剂组(10．32±0．89)、空白质粒组(10．09±0．97)SKOV3/DDP细胞凋亡率分别比较，差异均无统计学意义(P＞0．05)。见图5。2．7miＲ-101对SKOV3/DDP细胞caspase-3蛋白表达水平的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞caspase-3表达水平(1．36±0．08)较各对照组显著升高(F=68．45，P＜0．05);阴性对照组(0．82±0．06)、转染试剂组(0．83±0．05)、空白质粒组(0．84±0．07)比较，差异均无统计学意义(P＞0．05)。见图6。图5各组SKOV3/DDP细胞流式图图6各组SKOV3/DDP细胞caspase-3蛋白表达水平3讨论miＲNAs主要在转录后水平调控目的基因的表达，从而调节细胞的增殖、分化及凋亡;参与个体的发育、机体代谢及肿瘤的形成与耐药等。miＲNAs表达具有组织特异性，发挥着癌基因或抑癌基因的作用。人类miＲ-101包括miＲ-101-1和miＲ-101-2两种前体ＲNA，分别位于人1号和9号染色体中，扮演者抑癌基因的角色。目前研究表明，miＲ-101的表达下调甚至缺失可导致机体组织细胞周期的紊乱，分裂增殖速率加快，最终导致肿瘤的发生，细胞迁移力、侵袭力的改变及细胞耐药的形成［4－6］。Liu等［4］和Yin等［7］分别在上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP及肺非小细胞肺癌A549细胞中过表达miＲ-101，发现高表达水平的miＲ-101可促进顺铂诱导的细胞凋亡。本研究采用阳离子脂质体上调miＲ-101在SKOV3/DDP细胞的表达水平，给予不?
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-101对结直肠癌细胞SW620生物学特性的影响[J]. 刘燕,陆滟霞,周敏,郑林,李学农. 南方医科大学学报. 2016(07)
[2]人卵巢癌中细胞外调节激酶p-ERK蛋白表达的研究及意义[J]. 杜春芳,常彬,贾薇,朱慧敏,孙丽丽,单红英,卢立霞,杜金泽,刘泽宇,赵霞. 现代肿瘤医学. 2014(07)
[3]卵巢癌细胞中ERK1/2的表达及其与细胞凋亡的关系[J]. 姚娇,葛书霞,丁朝霞,陈爱平. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(09)
[4]ERK信号转导通路蛋白在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及与肿瘤恶性程度的相关性研究[J]. 李延,王滟,杨业洲,陈廉,夏庆杰. 实用妇产科杂志. 2006(03)
博士论文
[1]CLDN6通过AF-6抑制ERK信号通路对宫颈癌细胞侵袭的作用[D]. 张小伟.吉林大学 2015
硕士论文
[1]RNAi沉默ERK1/2基因对胃癌SGC7901细胞株Ezrin表达及侵袭迁移能力的影响[D]. 涂轶.南昌大学 2012
本文编号：3397471
【文章来源】：现代妇产科进展. 2017,26(08)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
各组SKOV3/DDP细胞miＲ-101相对表达量*P＜0．05vs阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组
ANOVA)，两两比较采用SNK检验。P＜0．05为差异有统计学意义。2结果2．1miＲ-101转染效果细胞转染24h后，miＲ-101组miＲ-101mＲNA表达量较各对照组显著增高(F=470．41，P＜0．05)。表明转染成功，且转染效率较高。见图1。2．2miＲ-101对SKOV3/DDP细胞顺铂敏感性的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞的顺铂IC50(34．78±3．39)与阴性对照组(60．97±1．09)、脂质体组(58．09±2．67)、空白质粒组(55．76±4．11)分别比较，差异均有统计学意义(F=43．75，P＜0．05);miＲ-101组SKOV3/DDP细胞的顺铂IC50明显降低。见图2。2．3miＲ-101对SKOV3/DDP细胞迁移力的影响miＲ-101组划痕24、48h划痕距离显著宽于各对照组(P＜0．05);阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组SKOV3/DDP细胞的划痕距离分别比较，差异均无统计学意义(P＞0．05)。见表1。2．4miＲ-101对SKOV3/DDP细胞侵袭力的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞透膜数量(158．67±9．71)与阴性对照组(235．00±12．00)、转染试剂组(241．67±10．50)、空白质粒组(235．33±13．58)比较，差异均有统计学意义(F=37．75，P＜0．05)。见图3。2．5miＲ-101对SKOV3/DDP细胞p-EＲK1/2、Vim-entin及E-cadherin蛋白表达水平的影响与阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组比较，miＲ-101组SKOV3/DDP细胞中p-EＲK1/2、Vimentin蛋白表达水平显著降低，E-cadherin蛋白表达显著增高，差异均有统计学意义(P＜0．05)。见表2、图4。图1各组SKOV3/DDP细胞miＲ-101相对表达量*P＜0．05vs阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组图2不同浓度顺铂作用下各组SKOV3/DDP细胞存活率*P＜0．05vs阴性对照组、转染试剂组、空白质粒组表1SKOV3/DDP细胞划痕距离比较(x珋±s)组别划痕距离(μm)0h24h48h阴性对
图3各组SKOV3/DDP细胞侵袭情况A:阴性对照组;B:转染试剂组;C:空白质粒组;D:miＲ-101组图4各组SKOV3/DDP细胞Vimentin、E-cadherin及p-EＲK1/2表蛋白达水平2．6miＲ-101对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞凋亡率(23．06±1．58)较各对照组明显显著增加(F=218．04，P＜0．05);阴性对照组(10．15±0．36)、转染试剂组(10．32±0．89)、空白质粒组(10．09±0．97)SKOV3/DDP细胞凋亡率分别比较，差异均无统计学意义(P＞0．05)。见图5。2．7miＲ-101对SKOV3/DDP细胞caspase-3蛋白表达水平的影响miＲ-101组SKOV3/DDP细胞caspase-3表达水平(1．36±0．08)较各对照组显著升高(F=68．45，P＜0．05);阴性对照组(0．82±0．06)、转染试剂组(0．83±0．05)、空白质粒组(0．84±0．07)比较，差异均无统计学意义(P＞0．05)。见图6。图5各组SKOV3/DDP细胞流式图图6各组SKOV3/DDP细胞caspase-3蛋白表达水平3讨论miＲNAs主要在转录后水平调控目的基因的表达，从而调节细胞的增殖、分化及凋亡;参与个体的发育、机体代谢及肿瘤的形成与耐药等。miＲNAs表达具有组织特异性，发挥着癌基因或抑癌基因的作用。人类miＲ-101包括miＲ-101-1和miＲ-101-2两种前体ＲNA，分别位于人1号和9号染色体中，扮演者抑癌基因的角色。目前研究表明，miＲ-101的表达下调甚至缺失可导致机体组织细胞周期的紊乱，分裂增殖速率加快，最终导致肿瘤的发生，细胞迁移力、侵袭力的改变及细胞耐药的形成［4－6］。Liu等［4］和Yin等［7］分别在上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP及肺非小细胞肺癌A549细胞中过表达miＲ-101，发现高表达水平的miＲ-101可促进顺铂诱导的细胞凋亡。本研究采用阳离子脂质体上调miＲ-101在SKOV3/DDP细胞的表达水平，给予不?
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-101对结直肠癌细胞SW620生物学特性的影响[J]. 刘燕,陆滟霞,周敏,郑林,李学农. 南方医科大学学报. 2016(07)
[2]人卵巢癌中细胞外调节激酶p-ERK蛋白表达的研究及意义[J]. 杜春芳,常彬,贾薇,朱慧敏,孙丽丽,单红英,卢立霞,杜金泽,刘泽宇,赵霞. 现代肿瘤医学. 2014(07)
[3]卵巢癌细胞中ERK1/2的表达及其与细胞凋亡的关系[J]. 姚娇,葛书霞,丁朝霞,陈爱平. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(09)
[4]ERK信号转导通路蛋白在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及与肿瘤恶性程度的相关性研究[J]. 李延,王滟,杨业洲,陈廉,夏庆杰. 实用妇产科杂志. 2006(03)
博士论文
[1]CLDN6通过AF-6抑制ERK信号通路对宫颈癌细胞侵袭的作用[D]. 张小伟.吉林大学 2015
硕士论文
[1]RNAi沉默ERK1/2基因对胃癌SGC7901细胞株Ezrin表达及侵袭迁移能力的影响[D]. 涂轶.南昌大学 2012
本文编号：3397471
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