巨噬细胞极化状态对卵巢癌转移能力的影响

发布时间：2021-09-28 17:55

　　目的:研究不同极化状态的巨噬细胞对上皮性卵巢癌转移能力的影响及其可能的调控机制。方法:1.小鼠颈椎脱臼处死,取双侧胫骨和腓骨骨髓,提取小鼠骨髓细胞,细胞培养基中添加巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）。分别应用脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）、γ-干扰素（interferon-γ,INF-γ）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）进行刺激,诱导分化获得M1型和M2型巨噬细胞。2.用流式细胞术鉴定不同极化状态的巨噬细胞的表面和胞内标志,巨噬细胞用F4/80,CD11b表面标志进行鉴定,M1型巨噬细胞利用CD11c表面标志进行鉴定,利用CD206标志对M2型巨噬细胞进行鉴定。利用qRT-PCR的方法鉴定M1型和M2型巨噬细胞相关细胞因子的mRNA表达水平。M1型巨噬细胞检测IL-1β、TNFα、IL-6和iNOS的mRNA,M2型巨噬细胞检测Arg-1、IL-10、TGF、Pparg和MCP-1的mRNA表达。3.建立0.4μM孔径的Transwell共培养系统,用不同巨噬细胞... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同巨噬细胞不同时期的形态特征

天津医科大学硕士学位论文 一、小鼠骨髓来源巨噬细胞提取鉴定及极化研究倍数下的进行观察。图 1B 为 UM0，M1 型和 M2 型巨噬细胞在 100×放大倍数下的形态特征。1.2.2 应用流式细胞术鉴定 M1 型和 M2 型巨噬细胞在小鼠细胞中，CD11b 主要表达于单核/巨噬细胞以及星形胶质细胞表面，而 F4/80 抗原表达于大部分成熟巨噬细胞表面[34]。骨髓来源的巨噬细胞一般为F4/80high，CD11bhigh表型。对提取培养的 BMDM 细胞（UM0 巨噬细胞）用 F4/80，CD11b 表面标志进行鉴定，结果显示 F4/80 和 CD11b 双阳性的亚群（F4/80﹢，CD11b﹢），即图 2B 右上角 Q2 为 94.9%，表明提取培养的骨髓单核细胞大部分分化为巨噬细胞（图 2）。

14图 3 应用 CD11c 和 CD206 标志物鉴定 M1 和 M2 型巨噬细胞图 3A F4/80﹢CD11b﹢双阳 M1 型巨噬细胞，图 3B 鉴定为 CD11c﹢CD206﹣；图 3C F4/80﹢CD11b﹢双阳 M2 型巨噬细胞，图 3D 鉴定为 CD11c﹣CD206﹢。1.2.3 应用 qRT-PCR 方法鉴定 M1 型和 M2 型巨噬细胞处于不同极化状态的巨噬细胞能够产生各自不同的细胞因子谱，以行使不同的生物学功能。为了观察应用不同的细胞因子诱导不同极化状态的巨噬细胞，本研究通过 qRT-PCR 技术检测 M1 型巨噬细胞标志物 IL-1β、TNFα、IL-6、iNOS


本文编号：3412334