骨膜素对子宫内膜间质细胞迁移、侵袭、粘附的调控及其机制研究

发布时间：2017-05-03 11:00

  本文关键词：骨膜素对子宫内膜间质细胞迁移、侵袭、粘附的调控及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的：子宫内膜异位症(endometriosis, EMs)是一种常见的妇科良性疾病,其发病率约占生育年龄女性的10%,治疗方式主要包括腹腔镜及促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)、芳香化酶抑制剂及孕酮等药物治疗,但术后仍有较高的复发率,长期使用药物会引起许多副反应。而且,EMs与恶性肿瘤及许多慢性病的发生有关,因此寻找一有效的治疗靶点至关重要。目前,EMs的发病机制尚不明确,但Sampson的经血逆流学说仍占主导地位,近年郎景和院士提出的在位内膜决定论为EMs的发病机理做出了补充说明,即子宫内膜碎片的异位粘附、侵袭及血管形成。骨膜素(periostin, PN)是成束蛋白Ⅰ家族的成员,在成体组织中低表达,但在肿瘤、损伤及炎症中起到至关重要的作用,高水平的PN可以促进肿瘤细胞粘附、侵袭、迁移及增殖。我们前期研究已表明PN在EMs的在位及异位内膜间质中高度表达,而在EMs病理生理过程中所起的作用尚未研究。本文通过检测PN对子宫内膜间质细胞(ESCs)粘附、迁移、侵袭及增殖能力的影响,进一步探索PN在EMs发生过程中的机制。方法：1.收集25例正常女性的子宫内膜,32例EMs患者的在位内膜及异位内膜,分离并纯化子宫内膜间质细胞,通过细胞免疫荧光法鉴定其来源及纯度。2.用Western blot的方法分别检测正常子宫内膜间质细胞(NSCs)、子宫内膜异位症在位(EuSCs)及异位内膜间质细胞(EcSCs)中PN、整合素连接激酶1 (integrin-linked kinase 1, ILK1)、 p-Akt的表达,比较三种蛋白的表达差异；通过实时定量PCR(qPCR)检测,分析三组细胞中PN mRNA的表达情况。3. PN siRNA于扰后分别检测PN、ILK1、p-Akt蛋白水平的变化。4. PN siRNA干扰后检测细胞粘附、迁移、侵袭及增殖等生物学行为的改变。结果：1. ESCs的鉴定及其纯度：采用胶原酶消化、筛网过滤法,成功地分离并纯化ESCs,经鉴定所培养的细胞绝大部分为间质细胞,其纯度是(96.1±2.2)%。2. PN、ILKl及p-Akt在NSCs、EuSCs、EcSCs中的表达情况：与NSCs相比,EuSCs及EcSCs中PN蛋白及mRNA的表达水平上调,但NSCs与EuSCs中PN mRNA表达无差异；在EuSCs及EcSCs中,ILK1和p-Akt的表达增加(P0.05)。3.PN对ILK1及p-Akt表达水平的影响：PN siRNA干扰后,PN、ILK1、 p-Akt的表达均下调(P0.05)。4.PN对ESCs迁移、侵袭、粘附及增殖的影响：EuSCs及EcSCs的迁移及侵袭能力较NSCs增强(P0.01；P0.001),PN siRNA干扰后,EcSCs的迁移及侵袭能力下降(P0.05；P0.01)；EcSCs的粘附速率最快(P0.05),PNsiRNA干扰的EcSCs与纤维连接蛋白(FN)相互作用60mins后,粘附能力下降明显(P0.05),EcSCs之间纤维连接增多,PN siRNA干扰后,细胞之间纤维样物质溶解；EuSCs与EcSCs的增殖能力较强,但是差异无统计学意义(P0.05),PN siRNA转染后,EcSCs增殖能力无明显变化。结论：1.胶原酶消化、筛网过滤法分离培养的ESCs纯度较高,NSCs、EuSCs及EcSCs的来源均为子宫内膜间质。2.PN通过激活ILK1/Akt信号通路促进ESCs迁移、侵袭及粘附,PN还能够促进细胞间纤维样物质生成。3.PN可能是治疗EMs的新型靶点。
【关键词】：骨膜素 子宫内膜间质细胞 ILK1/Akt 迁移 侵袭 粘附
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.71
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 符号说明11-13
• 前言13-17
• 材料与方法17-29
• 实验结果29-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 附图36-45
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 攻读学位期间发表的学术论文目录51-52
• 附件52

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本文编号：342847