靶向干扰Akt对耐顺铂人卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞体外生长的研究

发布时间：2021-10-15 08:45

　　目的：通过siRNA靶向沉默Akt基因，探讨其对卵巢癌细胞系SKOV3/DDP细胞生长的影响作用，为卵巢癌的基因治疗，提供新的实验依据。方法：1、采用Lipofectamine2000脂质体介导法将特异性的Akt siRNA转染入人卵巢癌SKOV3/DDP细胞，检测siRNA靶向沉默Akt后对卵巢癌细胞生长的影响。2、用转染试剂Lipofectamine2000包裹不同浓度荧光标记的siRNA（FAM-siRNA）转染SKOV3/DDP细胞，采用流式细胞仪检测其转染效率，确定siRNA最佳转染浓度。3、筛选有效Akt siRNA片段，实验分为5组：①空白对照组（control）②Akt siRNA-1③Akt siRNA-2④Akt siRNA-3⑤阴性对照组（Negative Control，NC）。转染48h后，用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组Akt mRNA的表达情况，筛选出Akt siRNA片段。4、Akt siRNA片段转染到卵巢癌SKOV3/DDP细胞后对细胞生长的影响。将筛选出的Akt siRNA片段经Lipofectamine2000转染到卵巢癌SKOV3... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 细胞
    2.2 主要仪器
    2.3 主要试剂
    2.4 实验方法
        2.4.1 Akt siRNA 序列的设计与合成
        2.4.2 细胞培养及其相关试剂的配置
        2.4.3 qRT-PCR 和 Western Blot 主要试剂的配置
        2.4.4 siRNA 的转染
    2.5 统计学分析
第3章 结果
    3.1 卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞的转染效率
    3.2 有效 Akt siRNA 片段的筛选
    3.3 siRNA 沉默 Akt 后对人卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞生长的影响
        3.3.1 卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞转染 48h 后，细胞周期的变化
        3.3.2 卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞转染 48h 后，细胞凋亡率的变化
        3.3.3 卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞转染 48h 后，细胞增殖活性的变化
        3.3.4 卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞转染 48h 后，Akt、p-Akt 蛋白表达水平的变化
第4章 讨论
    4.1 RNA 干扰及其作用机制
    4.2 人卵巢癌耐顺铂细胞株 SKOV3/DDP 细胞 siRNA 的转染
    4.3 siRNA 对人卵巢癌 SKOV3/DDP 细胞 Akt 基因表达的抑制作用
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 进一步研究方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3437763