EZH2通过激活CHEK1转录促进卵巢癌干细胞对顺铂耐药的研究

发布时间：2021-10-20 03:17

　　目的 课题组前期研究发现组蛋白甲基转移酶EZH2（enhancer of zeste homolog 2）在维持卵巢癌细胞干性中起重要作用,且EZH2高表达与卵巢癌干细胞顺铂耐药相关;用PCR芯片筛选发现细胞周期检查点激酶CHEK1（checkpoint kinase 1）可能是EZH2相关下游基因。本研究旨在探讨EZH2是否通过激活CHEK1促进卵巢癌干细胞的顺铂耐药。方法 1.在SKOV3细胞株中采用过表达质粒瞬时上调EZH2的表达。在前期通过动物皮下瘤化疗结合体外成球建立的SKOV3干细胞模型SK3rd中,采用慢病毒CRISPR/Cas9系统（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）构建稳定下调EZH2的细胞株SK3rd-sgEZH2。2.蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR实验检测EZH2表达质粒和CRISPR/Cas9转染后EZH2及CHEK1的表达变化。3.在SKOV3和A2780中采用过表达质粒瞬时上调EZH2的表达,或者采用siRNA（Small interfering RNA）干扰技术瞬时下调EZ... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

EZH2促进CHEK1的表达

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文CHEK1 启动子区的转录活性明显增加，为 5.3 倍，如图 2A 所示；同样地，在 A2780细胞中，与 pGL3 空载体相比上调 EZH2 后 CHEK1 启动子区的转录活性增加了 3.4倍，如图 2B 所示。反之，与对照组相比，在 SKOV3 细胞中用两条 siRNA 序列下调EZH2，CHEK1 启动子区的转录活性分别下降了 0.3 和 0.26 倍，在 A2780 细胞中，与对照组相比，下调 EZH2 之后 CHEK1 启动子区的转录活性分别下降了 0.46 倍和 0.39倍，如图 2A，B 所示。以上结果表明 EZH2 对 CHEK1 的启动子区有转录激活作用。

图 3 染色质免疫共沉淀结果显示 EZH2 能直接结合 CHEK1 的启动子区。（A）CHEK1 启动子区不同扩增片段示意图。（B）转录起始位点附近#1 区和#2 区的引物序列。（C）在 SKOV3细胞中，染色质免疫共沉淀实验检测与 EZH2 抗体结合的 CHEK1 启动子区域的不同片段。以 IgG作为阴性对照。（D）在 A2780 细胞中，染色质免疫共沉淀实验检测与 EZH2 抗体结合的 CHEK1启动子区域的不同片段。以 IgG 作为阴性对照。*P<0.05，**P<0.01。三、EZH2 通过 CHEK1 提高卵巢癌细胞的干性和耐药性为了进一步探讨 EZH2 对 CHEK1 的表达调控以及是否通过 CHEK1 促进卵巢癌细胞的干性和耐药性，我们先在卵巢癌细胞 SK3rd 中下调 EZH2（SK3rd-sgEZH2），检测 EZH2、CHEK1 及其下游分子的蛋白水平、细胞周期阻滞、凋亡率和耐药性的变化；再检测在 SK3rd-sgEZH2 中同时上调 CHEK1 时（SK3rd-sgEZH2/CHEK1）后，EZH2、CHEK1 及其下游分子的蛋白水平、细胞周期阻滞、凋亡率和耐药性的变化。3.1 EZH2 通过 CHEK1 促进卵巢癌细胞的干性


本文编号：3446142