基于MALDI-TOF质谱技术无创产前检测胎儿RhD血型和FGFR3热点突变

发布时间：2017-05-04 08:11

  本文关键词：基于MALDI-TOF质谱技术无创产前检测胎儿RhD血型和FGFR3热点突变，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分 测定母体血浆游离DNA分析预测胎儿RhD血型背景：RhD阴性孕妇怀有RhD阳性胎儿时可引起胎儿出现溶血,导致胎儿水肿、缺氧、黄疸、贫血甚至宫内死亡,同时增加早产的发生率。因此,RhD阴性孕妇胎儿RhD血型的产前诊断对胎儿溶血病的预防和早期干预具有重要意义。目的：基于MALDI-TOF MS方法分析母体血浆游离DNA预测胎儿RhD血型。方法：(1)本实验收集2013年8月至2015年3月中国人民解放军总医院和北京妇产医院开展产前检查的孕20-40周RhD阴性健康单胎孕妇的外周血,其丈夫为RhD阳性;(2)利用MALDI-TOF MS方法分析检测孕妇血浆游离DNA RHD基因外显子4、5、7、10以及RHD1227A判断胎儿RHD基因型预测胎儿RhD血型,其判断结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析。结果：收集40例RhD阴性孕妇的外周血游离DNA,经过MALDI-TOF MS分析胎儿RHD基因外显子4、5、7、10及RHD1227A,共发现1例RhDel型,1例RhD阴性及38例RhD阳性。35例皆得到产后脐带血的血清学验证。结果与产前胎儿RhD血型预测结果相符,5例RhD阳性跟踪失访。结论：利用MALDI-TOF质谱分析技术所建立的无创产前预测RhD阴性孕妇胎儿RhD血型的方法准确可靠,可用于临床开展。第二部分 利用孕妇血浆游离DNA检测胎儿FGFR3基因热点突变背景：软骨发育不全是胎儿短肢畸形常见的原因之一,但常在妊娠26周以后出现典型表现,临床诊断有一定局限性。98%的基因突变均发生在FGFR3 cDNA1138位点,这使得ACH产前诊断成为可能。目的：探讨MALDI-TOF MS质谱技术无创产前检测ACH致病基因FGFR3热点突变的可行性,以期实现妊娠中期筛查胎儿软骨发育不全。方法：收集2014年2月到2015年3月解放军总医院妇产科收治的3例经超声检查发现四肢短小的胎儿羊水或脐血标本及其父母的外周血。3个家系父母双方表型正常,提取其外周血基因组DNA,应用直接测序方法对FGFR3基因常见突变位点c.1138进行检测。排除染色体核型异常外,提取母体外周血游离DNA,应用MALDI-TOF MS进行FGFR3基因c.1138位点检测,判断胎儿有无此常见致病位点突变,并应用胎儿羊水或脐血基因组DNA进行验证。结果：3个家系父母双方正常,未携带'GFR3 c.1138位点突变。胎儿核型分析为46条染色体,结构无异常。MALDI-TOF MS结果考虑2个胎儿为FGFR3c.1138 GA杂合型突变,1个胎儿未检测到c.1138 GA,与后续从胎儿羊水或脐血提取的基因组DNA直接测序验证结果相符。结论：MALDI-TOF质谱分析技术可为无创产前诊断胎儿软骨发育不全提供新的手段,有望用于妊娠中期胎儿软骨发育不全的筛查,但仍需大量临床标本验证。
【关键词】：产前诊断 游离DNA MALDI-TOF MS RhD血型 产前诊断 游离DNA MALDI-TOF MS FGFR3
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.55
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 第一部分 测定孕妇血浆游离DNA鉴定预测胎儿RhD血型14-27
• 1. 材料14-15
• 2. 方法15-20
• 3. 结果20-23
• 4. 讨论23-26
• 5. 结论26-27
• 第二部分 利用孕妇血浆游寓DNA检测胎儿FGFR3 基因热点突变27-35
• 1. 对象与方法27-28
• 2. 方法28-29
• 3. 结果29-31
• 4. 讨论31-34
• 5. 结论34-35
• 展望35-36
• 参考文献36-40
• 综述40-51
• 参考文献44-51
• 攻读学位期间发表文章51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 周华友,兰炯采;人类Rh血型系统研究进展[J];中国输血杂志;2004年03期

2 谢俊杰;邵超鹏;;Rh血型D放散型(D~(el))[J];中国输血杂志;2011年01期

3 陆松松;陈静娴;;Rh(D)变异体的研究进展[J];临床输血与检验;2010年04期

4 李玉芝;任景慧;林琳华;姚秋璇;袁红;郭辉;李启运;何薇;张红云;王威;;大规模并行基因组测序技术应用于无创产前诊断染色体非整倍体的研究[J];华中科技大学学报(医学版);2012年04期

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本文编号：344711