BAP18对雄激素受体介导基因转录调控作用的影响及其在多囊卵巢综合征中的作用

发布时间：2021-10-23 04:04

　　目的:BAP18是一种重要的雄激素受体的辅调节因子,可以上调AR介导的基因转录,已报道在前列腺癌的发生发展中起重要作用。但在非肿瘤性疾病,例如以高雄激素血症为主要病理特征的多囊卵巢综合征中,BAP18的功能需要进一步探究。本研究的目的是:1.明确BAP18在多囊卵巢综合征患者颗粒细胞中的表达情况及与疾病的关系;2.阐明BAP18是否通过影响雄激素受体介导的基因转录影响多囊卵巢综合征的发生发展;3.探究BAP18影响AR介导基因转录的机制;4.探究BAP18与AR本身表达之间的联系及原因;5.探索BAP18在颗粒细胞中发挥的生物学功能。研究方法:1.通过收集多囊卵巢综合征女性与正常非PCOS女性的颗粒细胞,探究两组中BAP18的表达量,及BAP18的表达与PCOS疾病病例指标之间的联系;2.利用蛋白免疫共沉淀实验（co-IP）明确在颗粒细胞中BAP18是否与AR相互作用,利用免疫荧光实验验证BAP18与AR在颗粒细胞中的定位,然后利用双荧光素酶报告基因实验验证BAP18对AR介导的基因转录活性的影响;3.试图深入探讨BAP18影响雄激素信号通路的分子机制。寻找BAP18在颗粒细胞中可能影... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCOS组颗粒细胞中BAP18的mRNA表达低于对照组

中国医科大学硕士学位论文26囊卵巢综合征患者颗粒细胞中BAP18的蛋白表达显著低于在对照组女性颗粒细胞中的表达（p=0.0378）。图1.2PCOS组颗粒细胞中BAP18的蛋白表达低于对照组A：Westernblotting实验验证BAP18在多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞组织中和对照组患者卵巢颗粒细胞组织中的蛋白表达情况。PCOS组15例，PCOS为分组名称，编号1-15；对照组15例，Control为分组名称，编号1-15，GAPDH为内参。B：应用imageJ软件计算BAP18和GAPDH的条带灰度值，BAP18和对应GAPDH灰度值的比值作为该样本BAP18蛋白水平的相对表达量，汇总对照组和PCOS组的相对表达量，Studentt-test检验，*p=0.0378。3.1.3BAP18的表达与各生理指标的关系收集两组患者的多囊卵巢综合征相关生理指标，标定BAP18的蛋白平均表达后规定高于平均值为高表达，反之为低表达。以卡方检验为检验方法，统计分析BAP18蛋白表达水平与患者各项生理指标的联系。结果显示BAP18表达水平与多囊卵巢综合征相关生理指标密切相关。统计分析结果在表1中展示，BAP18的表达与患者LH/FSH、T和AMH的水平密切相关，并且这些指标与雄激素受体信号通路相关，提示我们BAP18可能成为预测PCOS的潜在指标。

中国医科大学硕士学位论文283.2BAP18与AR相互作用并上调AR介导的基因转录3.2.1BAP18可以与AR相互作用由于BAP18和多囊卵巢综合征中关键指标都有密切联系，而这些指标或多或少都与雄激素或雄激素受体通路相关，我们将关注BAP18是否与雄激素受体相关。首先，我们通过蛋白质免疫共沉淀实验发现在颗粒细胞细胞系KGN中，BAP18和AR都有表达且BAP18可以与内源性的雄激素受体相互作用。图2.1在颗粒细胞细胞系KGN中BAP18与AR存在相互作用A-B：蛋白质免疫共沉淀实验显示BAP18与AR之间的蛋白相互作用。input指10%全蛋白量，IgG指抗体阳性对照。3.2.2BAP18与AR在颗粒细胞中的定位BAP18和AR在颗粒细胞中都有表达，为进一步明确BAP18在颗粒细胞中的定位和AR在颗粒细胞中的定位，我们设计安排了免疫荧光共定位实验，发现在KGN细胞中，无论是否加入DHT，BAP18都主要在细胞核中表达，在细胞浆中表达很少。而AR在不加DHT刺激的情况下细胞核细胞浆均匀分布，在加入DHT时AR主要定位于细胞核中。而在另外一种颗粒细胞细胞系COV434中，在不加DHT的条件下，BAP18和AR在细胞浆中的分布均大于细胞核。而加入DHT的条件下，BAP18在细胞核中的分布多于细胞浆，AR蛋白处于均质分布。以上的结果表明，BAP18和AR在颗粒细胞中存在共定位。


本文编号：3452432