IMP3在宫颈HSIL与SCC病理诊断和临床预后的研究

发布时间：2017-05-05 14:20

  本文关键词：IMP3在宫颈HSIL与SCC病理诊断和临床预后的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景宫颈癌是全球女性第三常见的癌症,在2008年造成275000死亡人。众多研究证明高级别鳞状上皮内瘤变(High-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)能进展为鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma, SCC)。但区分两者非常必要,因为前者不一定进展为SCC,属于癌前病变；而后者具有侵袭性与转移性,而且两者临床治疗方式也不同。液基细胞学(LBC)比传统细胞学收集的宫颈细胞更丰富、制片背景清爽、诊断的敏感性更高,逐渐替代了传统的宫颈细胞学。通常,HSIL和SCC在经液基制片后不会造成诊断困难。但是有时由于细胞量少、肿瘤特征缺失和组织碎片的重叠等,难以区分SCC与HSIL,其中组织碎片和细胞拥挤是宫颈细胞学诊断上最常见的错误来源。因此,把宫颈细胞制成细胞块,不但保存了部分组织结构与细胞形态,而且还可以开展免疫组化、原位杂交和染色体倍性分析等辅助检查,成为细胞学诊断的一种辅助手段。宫颈鳞状上皮异常的细胞学诊断包括低级别鳞状上皮内瘤变(Low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)、 HSIL和SCC,这种分类方案不仅提供了标准化的术语,而且能指导临床治疗。值得注意的是,在实践工作中有些标本很难归于诊断模式细胞,导致LSIL过度诊断或HSIL诊断过低。为了减少细胞学与组织学诊断的之间的不一致率,免疫细胞化学,已被成为宫颈细胞学辅助诊断的重要手段。P16INK4a(p16),为肿瘤抑制蛋白,调节细胞的增殖,抑制细胞周期的G1期的进展,已证明在几乎所有的宫颈癌前期病变和浸润性癌均高表达。在宫颈细胞学检查,有文献用p16标记HSIL和SCC,研究证实HSIL和SCC均表达p16,因此采用免疫组化的方法有时难以区别SCC和HSIL。IMP3是胰岛素样生长因子(IGF)结合蛋白基因(IMP)的家庭成员,该家族包括IMP1, IMP2,和IMP3。也正是已知的KOC, IGF2BP3和1523s。成人IMP3通常在胎盘、淋巴结的生发中心和宫颈粘膜腺上皮,一些恶性肿瘤包括非小细胞肺癌、肺的神经内分泌癌、肺外小细胞癌、间皮瘤、肾细胞癌、子宫内膜样腺癌、结肠癌、黑色素瘤、平滑肌肉瘤高表达。采用免疫组化分析可以用来区分良性病变、低级别瘤变、高级别瘤变和浸润性癌,正常组织和宫颈上皮内瘤变I级IMP3表达阴性,CINⅡ表达极低、CIN Ⅲ表达增高、SCC高表达,高表达示临床过程不良和预后较差,在促进细胞的粘附和侵袭性伪足的形成发挥了重要作用。但IMP3未发现在宫颈细胞学标本检测的报道,宫颈癌前病变和宫颈癌的研究报道也较少。为此,本研究首先利用液基细胞学残液制备细胞蜡块,观测比较HSIL与SCC在液基细胞学形态特点与鉴别要点,随后检测细胞块切片IMP3和p16的表达,探究IMP3与p16分子标志物联合运用区别HSIL和SCC的可行性,同时检测了宫颈癌细胞株SiHa、HeLa细胞IMP3蛋白和mRNA的表达,尔后运用用免疫组织化学观测了IMP3在正常宫颈组织、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、与SCC的表达模式,评估IMP3与SCC发生、进展与预后的关系。目的1.建立一套宫颈液基细胞学细胞块的研制方法；2.提出宫颈HSIL与SCC鉴别的具体形态特征；3.验证IMP3和p16INK4a联合运用提高宫颈细胞学和组织学诊断符合率；4.观测IMP3在正常宫颈组织、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、SCC和宫颈癌细胞株的表达模式,评估IMP3与SCC发生、进展与预后的关系。方法1.宫颈液基细胞学细胞块的研制及宫颈HSIL与SCC鉴别的形态特征收集南方医科大学第三附属医院妇科门诊2008年1月1日到2009年12月30日液基残留标本制备细胞块。病变包括非典型鳞状细胞(ASC-H), LSIL, HSIL和SCC,共计141例,其中43例有活检确诊,95.7%制成细胞块,测量取得细胞块的大小,评估的细胞的形态特征：细胞簇(至少50个细胞)存在或不存在,细胞簇平均数；上皮间质交界的存在或不存在,上皮间质的平均数,间质消失情况,存在间质浸润的平均数；存在或不存在肿瘤坏死；进行统计分析。2.IMP3和p16INK4a联合运用提高宫颈细胞学和组织学诊断符合率的研究收集南方科大学第三附属医院2008-2010年的档案阳性标本(LSIL, HSIL,和SCC)共98例,由两位病理医师按照国际细胞学诊断标准(2001 Bethesda)对所有液基细胞学诊断及其对应细胞块切片进行了诊断并达成共识。细胞学诊断为LSIL、HSIL和SCC,细胞块诊断根据WHO宫颈诊断标准CIN1、CIN 2/CIN 3或SCC, CIN1的病理诊断相当于LSIL细胞学诊断,CIN2/3相当于HSIL, SCC相当于SCC。采用免疫细胞化学的方法,检测p16和IMP3在细胞块LSIL、HSIL和SCC表达,统计分析p16和IMP3表达在LSIL、HSIL和SCC的敏感性和特异性。3.IMP3表达与宫颈SCC预后相关性的研究运用免疫组化的方法,观测IMP3在宫颈正常组织、CIN及SCC的表达和染色定位,分析IMP3的表达与年龄、临床分期和淋巴结转移、组织学分级、浸润间质深度、肿瘤大小和淋巴血管间隙浸润、患者生存关系。采用Real-time PCQ和Western blot检测IMP3在宫颈癌细胞株的SiHa、HeLa细胞mRNA表达和蛋白的表达。4.统计方法采用统计软件SPSS 13.0对实验结果进行统计学处理和分析。组间比较采用计数资料的)c2检验。使用Log-Rank法进行单因素生存分析,绘制]Kaplan-Meier生存曲线,多因素生存分析采用Cox回归。Real-time PCR结果用单向方差分析(one-way ANOVA).按P0.05,差异具有统计学意义。结果1.宫颈液基细胞学细胞块的研制及宫颈HSIL与SCC鉴别的形态特征93%(40/43)细胞块诊断与组织学诊断一致,比单纯采用细胞学诊断(81.4%,35/43)要好。细胞块平均大小,在HSIL为0.54cm(0.3-1.0cm),SCC为0.84cm(0.4-1.4cm),两者相比存在显著性差异(P0.0001)。细胞团的存在,HSIL为70.8%(17/24),SCC为100%(19/19),具有统计学意义(P0.0001)。间质浸润、突破基底膜和肿瘤坏死,SCC细胞块84.2%(16/19)有问质浸润,68.4%(13/19)可见突破基底膜,42.1%(8/19)有肿瘤坏死,；而HSIL没有观察到基底突破,间质浸润或肿瘤坏死,HSIL和SCC之间存在显著性差异显著(P0.0001)。2.IMP3和p16INK4a联合运用提高宫颈细胞学和组织学诊断符合率研究在98例细胞病理诊断,其中37例为LSIL,36例为HSIL,25例为SCC；LBC细胞病理诊断与组织病理诊断符合率分别为LSIL59.5%(22/37), HSIL63.9%(23/36),SCC为88.0%(22/25),总符合率为68.4%(67/98)。P16在HSIL(72.2%)和SCC(100%)高表达,而在LSIL(29.7%)表达率较低。IMP3在84%的SCC高表达,LSIL和HSIL表达率分别为8.1%和25.0%。p16和IMP3组合表达归纳为以下三类：P16-/IMP3-,p16+/IMP3-,或p16+/IMP3+;一般情况下,P16-/IMP3-为CIN1,p16+/IMP3-为CIN2/3,p16+/ IMP3+为SCC。3.IMP3表达与宫颈SCC预后相关性的研究(1)IMP3在宫颈正常组织和宫颈CIN及宫颈SCC的表达IMP3在40例正常宫颈组织不表达(0%)。在204例宫颈上皮内瘤变中4.4%表达IMP3,62例CIN I和38例CIN II中不表达,104例CIN III中有9例(8.7%)表达IMP3,96例SCC中54例表达IMP3(56.3%)。所有测试的组之间存在显著性差异(P0.001)。9例CIN Ⅲ中,8例(88.9%)IMP3弱阳性表达,染色定位于受累区的中心部,在细胞层基底部为阴性。IMP3阳性54例SCC病例中,染色弱、中、强的比率分比例分别为15例(27.8%)、20例(37%)、19例(35.2%)；11例(20.3%)得分为1、9例(16.7%)得分为2、9例(16.7%)得分为3、25例(46.3%)得分为4；弥漫阳性组88.9%(48/54)和中央阴性组11.1%(6/54),弥漫阳性组在癌巢内弥漫阳性；而中央阴性组病例中,IMP3阳性定位在癌巢周围,癌巢中心不着色,癌巢周边为角化的癌细胞,细胞间桥明显,有角化珠形成,分化差的癌细胞和核分裂像位于癌巢的中心,组织病理学癌细胞呈嵌套式的增长模式。(2)IMP3的表达与临床病理特征的关系IMP3表达与年龄(P0.001)和临床分期(P0.001)及淋巴结转移有关(P=0.001)显著相关,与组织学分级(P=0.125)、浸润间质深度(P=0.242)、肿瘤大小(P=0.298)和淋巴血管间隙浸润(P=0.459)无关显著相关。(3)IMP3表达与预后的意义60例患者随访60个月,患者的中位生存时间为58.13个月(范围,9-87个月),其中18例(30.0%)死亡。IMP3阳性患者的存活率比IMP3阴性患者要差(P=0.005)。(4)IMP3蛋白在宫颈癌细胞株的mRNA表达IMP3 mRNA表达,与正常宫颈组织(1±0.05)相比,SiHa (2.29±0.14, P0.001)和HeLa (1.33±0.05, P0.05)。Western blot分析进一步表明IMP3蛋白在SiHa、HeLa细胞表达,而在正常宫颈IMP3表达很低。结论1.液基残余液体样品能制备完好的细胞块,增加了液基细胞学诊断的准确性,在间质浸润、上皮间质交界反应和肿瘤坏死三方面的观察有力于区别HSIL与SCC；2.p16/IMP3比LBC敏感性高,但特异性较低；IMP3是确定SCC有用的诊断免疫标记,与p16联合运用,可提高细胞学诊断与组织学诊断HSIL和SCC的符合率；3.IMP3的表达是宫颈SCC预后的独立因素,是预后差的指标；4.采用IMP3标记定位可将SCC分为弥漫阳性组和中央阴性组,在SCC表达模式不同意义仍待进一步研究。
【关键词】：子宫颈 宫颈上皮内瘤变 鳞状细胞癌 IMP3 预后
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-19
• 前言19-27
• 参考文献20-27
• 第一章 宫颈液基细胞学细胞块的研制及HSIL与SCC区别的形态特征27-38
• 1 材料和方法27-28
• 2 结果28-32
• 3. 讨论32-34
• 参考文献34-38
• 第二章 IMP3和p16~(INK4α)联合运用提高宫颈细胞学和组织学诊断符合率的研究38-52
• 1 材料和方法39-40
• 2 结果40-45
• 3. 讨论45-47
• 参考文献47-52
• 第三章 IMP3表达与宫颈SCC预后相关性的研究52-70
• 1 材料和方法52-59
• 2. 结果59-65
• 3. 讨论65-67
• 参考文献67-70
• 全文小结70-72
• 附录1：英文缩写注解72-73
• 附录2：IMP3与宫颈癌侵袭与转移的关系综述73-82
• 参考文献77-82
• 攻读硕士学位期间成果82-83
• 致谢83-84

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 黄新立;高园园;丁军;王学浩;;原发性肝细胞肝癌组织中IMP3表达与临床特点和基因甲基化相关性的研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2014年05期

2 李明;张亚军;;IMP3蛋白在子宫颈癌中的表达及其与MVD的关系[J];海南医学院学报;2015年10期

3 张著学;杨迎春;易韦;文安智;吴倩;;胃肠道间质瘤中IMP3的表达及意义[J];实用医学杂志;2014年19期

4 常江;王颖;柳利;王满仓;;IGF2BP3低甲基化与结肠癌组织分化的关系[J];天津医药;2015年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 李文君;IMP3、RFP、HER-2蛋白在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2014年

2 王亚娟;IGF-Ⅱ及IMP3在重度子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义[D];河北医科大学;2014年

3 李冰熠;IMP1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其意义[D];郑州大学;2014年

4 胡帅;IMP3联合CD44s预测肝癌肝切除患者预后的实验研究[D];南京医科大学;2014年

5 刘纪昀;胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3、p16在宫颈上皮内肿瘤及癌的表达及意义[D];贵阳医学院;2014年

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本文编号：346525