长链非编码RNA PVT1在重度子痫前期的表达及功能研究

发布时间：2021-11-10 05:51

　　目的:子痫前期（preeclampsia,PE）是引起我国孕产妇死亡的主要原因之一,能够引起胎盘缺血缺氧,并伴随多器官损伤、水肿、神经系统异常等并发症。目前研究普遍认同引起子痫前期主要原因之一是螺旋小动脉重铸不足,而滋养细胞的增殖、迁移、侵袭、分化及凋亡等行为在螺旋小动脉重铸过程中起到了至关重要的作用。因此滋养细胞的功能在子痫前期的发生和发展中扮演着重要的角色。浆细胞瘤可变易位基因1（plasmacytoma variant translocation 1,PVT1）属于长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）。近年来多项研究表明PVT1参与了肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭等多种生物学过程,但是其在重度子痫前期中对滋养细胞的影响及机制,目前尚未见研究及报道。因此本实验通过检测正常妊娠孕妇的胎盘组织和重度子痫前期孕妇的胎盘组织中PVT1的基因表达量,分析二者之间表达量的差异,然后在人绒毛膜滋养层细胞系（HTR8-S/Vneo）中,通过抑制或者过表达PVT1,来验证PVT1在重度子痫前期的影响及机制。方法:（1）选取15例重度子痫前期孕产妇为实验组,另选... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【部分图文】：

正常胎盘组织与重度子痫前期胎盘组织中PVT1的表达量

第3章实验结果24注：图3.1qRT-PCR检测正常胎盘组织与重度子痫前期胎盘组织中PVT1基因的表达水平。用Mean±SD表示结果，每组至少3个独立重复。**p<0.01表示与Normal相比。3.2抑制PVT1对滋养细胞的增殖、凋亡、迁移的影响3.2.1siRNA-PVT1干扰效率的检测首先，我们用siRNA-PVT1#1、siRNA-PVT1#2、siRNA-PVT1#3分别转染细胞，通过qRT-PCR检测PVT1的mRNA水平来评估沉默效率，结果显示转染48h后siRNA-PVT1#3对PVT1的抑制效率最明显（图3.2），因此下面实验我们选用siRNA-PVT1#3进行细胞转染。图3.2不同siRNA对PVT1的抑制效率注：图3.2用siRNA-PVT1#1、siRNA-PVT1#2、siRNA-PVT1#3分别刺激HTR8-S/Vneo细胞48h。48h后，通过qRT-PCR检测PVT1mRNA表达量的变化。用Mean±SD表示结果，每组至少3个独立重复。*p<0.05表示与NC相比。3.2.2siRNA-PVT1对滋养细胞增殖的影响用siRNA-PVT1处理HTR8-S/Vneo48h，48h后通过CCK8检测发现抑制PVT1后能够显著抑制滋养细胞的增殖（图3.3A）。EDU染色结果和CCK8结果一致（图3.3B）。通过Westernblot检测细胞

第3章实验结果25增殖的标记物PCNA的蛋白水平。结果显示，抑制PVT1后能够显著抑制PCNA的蛋白表达（图3.3C&D）。以上实验结果表明，抑制PVT1能够显著抑制细胞增殖。图3.3转染siRNA-PVT148h后对细胞增殖的影响注：siRNA-PVT1刺激HTR8-S/Vneo细胞48h。图3.3A,CCK8检测HTR8-S/Vneo细胞的增殖。图3.3B,EDU染色检测HTR8-S/Vneo细胞的增殖。图3.3C,Westernblot检测增殖蛋白PCNA，以GAPDH为内参。图3.3D,增殖蛋白PCNA的蛋白条带的灰度分析结果。用Mean±SD表示结果，每组至少3个独立重复。*p<0.05表示与NC相比。3.2.3siRNA-PVT1对滋养细胞迁移的影响为了研究PVT1对HTR8-S/Vneo细胞迁移的影响，用siRNA-PVT1处理HTR8-S/Vneo细胞24h，通过划痕实验发现与NC相比，抑制PVT1可显著抑制HTR-8-S/Vneo细胞的迁移（图3.4A&B）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路调节滋养层细胞的增殖、浸润和凋亡[J]. 李勤,许娟秀.  南方医科大学学报. 2020(01)
[2]长链非编码RNA-TCL6在胎盘植入组织中的表达水平及对滋养层细胞活性和迁移的影响[J]. 王瑞,吴淑贞,李杨,陈娟.  实用医学杂志. 2019(13)
[3]子痫前期发病机制与临床治疗研究进展[J]. 李可,朱大伟,陈建昆,韩健,郑秀慧,郭建新,李力.  解放军医学杂志. 2019(05)
[4]miRNA和lncRNA及相关信号转导通路对滋养细胞浸润功能的影响及其机制[J]. 唐希阳,史安平,赵首捷,朱晓明.  国际妇产科学杂志. 2019(01)
[5]浆细胞瘤多样异位基因1在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响[J]. 李晓珍,任琛琛,刘灵,刘泇希.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2018(02)
[6]不同孕周重度子痫前期对母婴及围产结局的影响[J]. 王利晓.  现代诊断与治疗. 2017(11)
[7]子宫螺旋动脉重铸与病理妊娠[J]. 董胜雯,郭洁,宋殿荣.  国际妇产科学杂志. 2017(02)
[8]长链非编码RNA PVT1在肿瘤中的研究进展[J]. 万里,马天云,王朝霞.  临床肿瘤学杂志. 2016(06)

硕士论文
[1]LncRNA PVT1在胃癌中的表达与临床意义研究[D]. 任显显.石河子大学 2017
[2]LncRNA PVT1靶向p300调控p53的转录活性影响肝癌细胞HepG2对5-Fu和DDP的药物敏感性[D]. 黄楠.南华大学 2017



本文编号：3486707