HPV通过肿瘤外泌体Mortalin对永生化宫颈上皮细胞恶性转化的作用及机制

发布时间：2021-11-28 06:13

　　目的:通过比较不同人类乳头瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV）感染状态下宫颈癌外泌体Mortalin（Exo-Mortalin）表达差异,明确HPV感染通过转录因子CTCF调控Exo-Mortalin表达的上游机制;探究癌源Exo-Mortalin对永生化宫颈上皮细胞H8的恶性表型转化作用;阐释Exo-Mortalin在永生化宫颈上皮细胞H8内通过Mortalin-p53-Gadd45A通路发挥作用的下游机制。方法:利用超高速离心法提取宫颈癌细胞系外泌体,通过蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）、透射电镜（TEM）以及纳米粒子示踪分析（NTA）对外泌体进行鉴定。分别利用CRISPR/Cas9和慢病毒技术构建KoHPV-E6/E7-SiHa（Knockout-HPVE6/E7-SiHa）稳转细胞系以及 KdMortalin-SiHa/Caski（Kncokdown-Mortalin-SiHa/Caski）细胞株。利用 WB 技术检测 Exo-Mortalin、CTCF、HPVE6/E7、p53及Gadd45A的表达情况。采用荧光素酶实验验证CTCF对Mor... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１．外泌体的鉴定

?的存在与细胞外泌体的Ｍｏｒｔａｌｉｎ表达的关系。如图ｌ－２ｂ所示，ＳｉＨａ组Ｍｏｒｔａｌｉｎ??表达量比Ｃ－３３Ａ组更高。??ａ?ｂ??ＳｉＨａ?Ｃ－３３Ａ?Ｈ８?ＳｉＨａ?Ｅｘｏｓ?Ｃ－３３Ａ?Ｅｘｏｓ??Ｍｏｒｔａｌｉｎ?＿?丨丨’?丨一－丨丨丨＿＿一?—＾￣－＾?與?７０ｋＤ?Ｍｏｒｔａｌｉｎ?７０?ｋＤ??ｃｄ６３?４２?ＫＤ??ｈｐｖ?Ｅ６?１３?ｋＤ??ｇａｐｄｈ?ｍｍｍｍｍ?ｍｍｍｍｒｎｍ?ｍｍｍｍｍｍ?３７?ｋＤ?ＣＤ９?２３?ｋＤ??图１－２．?ＨＰＶ（＋）／（－）宫颈癌细胞及外泌体Ｍｏｒｔａｌｉｎ的表达对比。（ａ）通过ＷＢ比较ＳｉＨａ??与Ｃ－３３Ａ细胞内Ｍｏｒｔａｌｉｎ表达，结果显示ＨＰＶ阳性的ＳｉＨａ细胞内Ｍｏｒｔａｌｉｎ表达更高，ｐ５３??含量相对降低。（ｂ）提取两种细胞外泌体后，ＷＢ显不Ｍｏｒｔａｌｉｎ在ＳｉＨａ外泌体（ＳｉＨａ－ｅｘｏｓ）??内表达含量更高。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２．?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｍｏｒｔａｌｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＨＰＶ?（＋）?／（－）?ｃｅｒｖｉｃａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ??ｅｘｏｓｏｍｅｓ．?（ａ）?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｏｒｔａｌｉｎ?ｉｎ?ＳｉＨａ?ａｎｄ?ｃ－３３ａ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｂｙ?ＷＢ．?Ｔｈｅ??ｒｅｓｕｌｔｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｔｈａｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｏｒｔａｌｉｎ?ｉｎ?ＳｉＨａ?ｃｅｌｌｓ?ｗｉｔｈ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ＨＰＶ?ｗａｓ?ｈｉｇｈｅｒ，?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ｐ５３?ｗａｓ?ｌｏｗｅｒ，?（ｂ）?Ａ

Ｍｏｒｔａｌｉｎ?＾＊＊＊＊＾，?？?７０?ｋＤ?ｇ?１５??ＨＰＶＥ６?１５?ｋＤ?｜?ｉ－〇?麵??ＨＰＶ?Ｅ７?■■■＇■＂?－?１１?ｋＤ?，３?〇５??…??ｇａｐｄｈ?＇ｍｍ１１１１１＊關丨丨—１?＊７?ｋＤ?至１?ｉＴｐ?ｔ?辛??白??，，，，??ｑ?Ｅｘｏｓｏｍｅｓ?＾?＾??ＳｉＨａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＫｏＥ６／Ｅ７?ＳｉＨａ??Ｍｏｒｔａｌｉｎ?场?７０?ｋＤ??ＣＤ６３?４３?ｋＤ??ｃ〇９?２３?ｋＤ??图１－３．?ＫｏＨＰＶＥ６／Ｅ７－ＳｉＨａ细胞构建及其细胞和外泌体Ｍｏｒｔａｌｉｎ表达变化，（ａ）对ＳｉＨａ??细胞敲除ＨＰＶＥ６／Ｅ７后，ＨＰＶＥ６和Ｅ７的蛋白表达量降低，同时Ｍｏｒｔａｌｉｎ含量随之Ｆ降。（ｂ）??２１??


本文编号：3523870