ROS在竹节香附素A抑制Skov3细胞增殖中的作用及机制

发布时间：2017-05-09 14:51

  本文关键词：ROS在竹节香附素A抑制Skov3细胞增殖中的作用及机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景 卵巢癌（ovariancancer）是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居于妇科恶性肿瘤的首位。手术辅以术后化疗是目前治疗卵巢癌的主要方式，虽然手术、化疗和放疗技术均有所改进，但晚期卵巢癌患者的长期生存率未得到明显提高，究其原因与化疗药物的毒副作用以及产生耐药性有关，因此寻找新的治疗药物并阐明其作用机制具有重要的理论意义和应用价值。中医药的研究与应用历史悠久，已证实多种中草药具有抗肿瘤活性，且毒副作用低，因而成为抗肿瘤药物的研究热点。两头尖是毛莨科银莲花属多被银莲花的干燥根茎，又名竹节香附，具有良好的抗肿瘤效应，其中以单体成分竹节香附素A最为显著。研究表明，竹节香附素A对包括卵巢癌在内的多种肿瘤具有良好的抗肿瘤效应，但其抑癌机制尚未明确。活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）是细胞内重要的氧化还原信号分子，可调控细胞凋亡及细胞增殖，多种药物可通过改变肿瘤细胞内的ROS水平发挥其药物活性。 研究目的： 以竹节香附素A处理卵巢癌Skov3细胞，探讨ROS在竹节香附素A抑制卵巢癌细胞Skov3增殖中的作用及机制。 研究方法： ①MTT法检测竹节香附素A对Skov3细胞增殖活性的影响；②流式细胞术检测竹节香附素A对Skov3细胞内ROS含量的影响；③MTT法检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞增殖活性影响；④相差显微镜下观察NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞形态的影响；⑤流式细胞术、DHE探针荧光染色检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞内ROS含量的影响；⑥流式细胞术检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞凋亡及细胞周期的影响；⑦WesternBlot法检测NAC预处理后竹节香附素A对P53、CDK4、cyclinB1、Chk1、P21、ATR蛋白表达的影响；⑧AO染色检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞内自噬溶酶体的影响；⑨WesternBlot法检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞内自噬相关蛋白LC3表达的影响；⑩MTT法检测自噬抑制剂3-MA预处理后竹节香附素A对Skov3细胞增殖活性的影响。 研究结果： ①竹节香附素A可抑制Skov3细胞的增殖，该作用具有量效关系；②竹节香附素A可以引起Skov3细胞内ROS含量升高，NAC预处理后，可以降低细胞内ROS的水平，并使细胞增殖抑制率升高，该作用与细胞凋亡无关，但使G2/M期细胞比例升高，产生G2/M期阻滞，并下调ATR、Chk1、CDK4和cyclinB1蛋白的表达，上调P21、P53蛋白的表达；③竹节香附素A作用Skov3细胞后可使细胞自噬增多，上调LC3蛋白的表达；NAC预处理后抑制细胞自噬，下调LC3蛋白的表达；④3-MA预处理后，竹节香附素A对Skov3细胞的增殖抑制率升高。 结论： ①竹节香附素A可抑制卵巢癌细胞Skov3增殖，该作用具有量效关系；②竹节香附素A作用于Skov3细胞后，在发挥抗肿瘤效应的同时，通过产生低浓度的ROS，降低其药物活性；③清除ROS后，竹节香附素A的抗肿瘤活性增强，该作用与细胞凋亡无关，其可能的机制是：一方面通过调控ATM/ATR-Chk1/Chk2-Cdc25信号通路，使细胞周期阻滞于G2期，另一方面通过抑制细胞自噬，减弱自噬对肿瘤细胞的保护作用。
【关键词】：竹节香附素A 人卵巢癌细胞Skov3 ROS 细胞周期 细胞自噬
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要英文词缩写表10-11
• 第1章 引言11-12
• 第2章 文献综述12-17
• 2.1 卵巢癌的治疗现况12
• 2.2 竹节香附素A的研究现况12-13
• 2.3 ROS与肿瘤相关性13-14
• 2.4 ROS与炎症14
• 2.5 ROS与细胞周期14
• 2.6 ROS诱导血管生成14
• 2.7 ROS与肿瘤细胞的侵袭14-15
• 2.8 ROS对肿瘤的两面性15
• 2.9 ROS与肿瘤的治疗15
• 2.10 ROS诱导细胞自噬与肿瘤的治疗15-17
• 第3 章研究内容17-31
• 3.1 实验材料17-21
• 3.1.1 实验用细胞17
• 3.1.2 主要仪器与设备17-18
• 3.1.3 药物及主要试剂18-19
• 3.1.4 实验用主要相关试剂配制方法19-21
• 3.2 实验方法21-30
• 3.2.1 细胞培养相关操作21-22
• 3.2.2 MTT法检测竹节香附素A对Skov3细胞增殖活性的影响22-23
• 3.2.3 流式细胞术检测竹节香附素A对Skov3细胞内ROS含量的影响23-24
• 3.2.4 MTT法检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞增殖活性的影响24
• 3.2.5 倒置显微镜观察NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞形态的影响24
• 3.2.6 流式细胞术检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞ROS含量的影响24
• 3.2.7 DHE染色检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞内ROS含量的影响24-25
• 3.2.8 流式细胞术检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞凋亡的影响25-26
• 3.2.9 流式细胞术检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞周期的影响26
• 3.2.10 WesternBlot法检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞周期相关蛋白P53、CDK4、cyclinB1、Chk1、P21及ATR表达的影响26-29
• 3.2.11 AO染色检测NAC预处理后竹节香附素A对Skov3细胞自噬溶酶体的影响29
• 3.2.12 WesternBlot法检测NAC预处理后竹节香附素A对自噬相关蛋白LC3表达的影响29
• 3.2.13 MTT法检测3-MA预处理后竹节香附素A对Skov3细胞增殖活性的影响29-30
• 3.3 数据统计30-31
• 第4章 实验结果31-42
• 4.1 竹节香附素A抑制Skov3细胞的增殖31
• 4.2 竹节香附素A使Skov3细胞内ROS含量升高31-32
• 4.3 NAC预处理后细胞增殖抑制率增加32-33
• 4.4 NAC预处理后对Skov3细胞形态的影响33-34
• 4.5 NAC预处理后降低Skov3细胞内ROS水平34-35
• 4.6 NAC预处理后对Skov3细胞凋亡无影响35-36
• 4.7 NAC预处理后产生G2/M期阻滞36-38
• 4.8 NAC预处理后对相关蛋白表达的影响38-39
• 4.9 NAC预处理后抑制细胞自噬39-41
• 4.10 3-MA预处理后细胞增殖抑制率增加41-42
• 第5章 讨论42-48
• 结论48-49
• 参考文献49-56
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果56-57
• 致谢57

【参考文献】

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本文编号：352672