下调Rab11基因对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及机制探讨
发布时间：2021-12-09 03:38
背景与目的:Rab11基因在宫颈癌细胞中高表达,可能与细胞恶性转化相关。本研究采用RNA干扰技术下调Rab11基因表达,并探讨其对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及可能的相关机制。方法:将HeLa/SiHa细胞分为2组:阴性对照组（转染阴性对照的小干扰RNA）和Rab11 siRNA干扰组（转染小干扰Rab11siRNA）。蛋白[质]印迹法（Western blot）检测Rab11干扰效果,检测转染Rab11 si RNA后,侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）和MMP9表达的变化;细胞划痕损伤实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;细胞免疫荧光实验从形态学角度探索在小干扰Rab11后Rac1蛋白在细胞膜上聚集位置的变化。结果:转染小干扰Rab11siRNA到He La/SiHa细胞后,Rab11蛋白表达受到高效抑制（P<0.01）;细胞迁移、侵袭能力受到抑制（P<0.05）,Rac1蛋白表达明显下调（P<0.01）,MMP2、MMP9蛋白表达下调（P<0.05）,Rab...
【文章来源】：中国癌症杂志. 2016,26(03)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
Rab11siRNA对于Rab11蛋白表达的影响
24012、24和36h时在倒置显微镜下(10×10)测量划痕的宽度。细胞迁移率=(1-测量时划痕宽度/初始划痕宽度)×100%。1.2.5细胞免疫荧光实验检测Rac1的定位改变将两组转染后的细胞培养48h的6孔板(铺有盖玻片)从培养箱中取出，PBS洗后，4%多聚甲醛固定20min，0.5%TritonX-100处理细胞10min，2%BSA封闭lh，每个盖玻片上滴加50μL稀释好的一抗，置于4℃过夜，每个盖玻片上加入50μL左右稀释好的荧光二抗，室温温育1h，每孔加入染核试剂DAPI少许，室温下放置5min，加入封片剂封片，荧光显微镜下观察拍照。1.3统计学处理所有研究均设3份平行实验，采用SPSS16.0软件对上述结果进行分析，计量资料采用x±s表示，组间两两比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1Rab11siRNA干扰后Rab11蛋白的抑制情况Westernblot检测结果显示，在25×103处有灰色条带显示，Rab11蛋白在Rab11siRNA组的表达量明显低于si-negativecontrol组(HeLa组t=5.120，P＜0.01，SiHa组t=4.956，P＜0.01，图1)。2.2Rab11siRNA转染后细胞侵袭能力的检测Transwell小室实验结果显示，与si-negativecontrol组相比，转染Rab11siRNA组HeLa/SiHa细胞的侵袭能力明显下降，差异均有统计学意义(HeLa组t=16.841，P＜0.01；SiHa组t=18.244，P＜0.01，图2)。图1Rab11siRNA对于Rab11蛋白表达的影响Fig.1EffectofRab11siRNAonRab11expression图2Rab11siRNA对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭能力的影响Fig.2EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellinvasioncapacity阚岩岩，等.下调Rab11基因对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及机制探讨
《中国癌症杂志》2016年第26卷第3期2412.3Rab11siRNA转染后细胞迁移能力的检测细胞划痕损伤实验结果显示，Rab11siRNA组与si-negativecontrol组相比，HeLa/SiHa细胞的迁移能力明显降低(HeLa组24ht=3.909，P＜0.01，36ht=2.997，P＜0.05，SiHa组24ht=4.007，P＜0.01，36ht=2.838，P＜0.05，图3)。2.4Rab11siRNA干扰后Rac1、MMP2和MMP9蛋白的表达情况Westernblot检测结果显示，在21×103、72×103和92×103处有灰色条带显示，Rac1、MMP2和MMP9蛋白在Rab11siRNA组的表达量明显低于si-negativecontrol组(Rac1蛋白HeLa组t=8.794，P<0.01，SiHa组t=15.650，P<0.01；MMP2蛋白HeLa组t=5.634，P<0.01，SiHa组t=4.391，P<0.05；MMP9蛋白HeLa组t=3.430，P<0.05，SiHa组t=4.082，P<0.05，图4)。2.5转染Rab11siRNA对宫颈癌细胞骨架蛋白Rac1定位的影响Rab11siRNA组与si-negativecontrol组相比，分布在细胞周围的红色荧光强度降低，集中在细胞膜前端上的红色荧光明显减少(红色荧光为分布在细胞膜上的Rac1蛋白，蓝色荧光为细胞核DAPI染色，图5)。图3Rab11siRNA对宫颈癌HeLa/SiHa细胞迁移能力的影响Fig.3EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellmigrationcapacity图4Rab11siRNA对宫颈癌HeLa/SiHa细胞中Rac1、MMP2和MMP9蛋白表达的影响Fig.4EffectofRab11siRNAonRac1,MMP2andMMP9expressioninhumancervicalcancerHeLa/SiHacell
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ⅰb2期巨块型宫颈癌术前不同治疗方法的疗效观察[J]. 韩娜娜,邵文裕,刘开江,马焱. 中国癌症杂志. 2015(01)
本文编号：3529841
【文章来源】：中国癌症杂志. 2016,26(03)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
Rab11siRNA对于Rab11蛋白表达的影响
24012、24和36h时在倒置显微镜下(10×10)测量划痕的宽度。细胞迁移率=(1-测量时划痕宽度/初始划痕宽度)×100%。1.2.5细胞免疫荧光实验检测Rac1的定位改变将两组转染后的细胞培养48h的6孔板(铺有盖玻片)从培养箱中取出，PBS洗后，4%多聚甲醛固定20min，0.5%TritonX-100处理细胞10min，2%BSA封闭lh，每个盖玻片上滴加50μL稀释好的一抗，置于4℃过夜，每个盖玻片上加入50μL左右稀释好的荧光二抗，室温温育1h，每孔加入染核试剂DAPI少许，室温下放置5min，加入封片剂封片，荧光显微镜下观察拍照。1.3统计学处理所有研究均设3份平行实验，采用SPSS16.0软件对上述结果进行分析，计量资料采用x±s表示，组间两两比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1Rab11siRNA干扰后Rab11蛋白的抑制情况Westernblot检测结果显示，在25×103处有灰色条带显示，Rab11蛋白在Rab11siRNA组的表达量明显低于si-negativecontrol组(HeLa组t=5.120，P＜0.01，SiHa组t=4.956，P＜0.01，图1)。2.2Rab11siRNA转染后细胞侵袭能力的检测Transwell小室实验结果显示，与si-negativecontrol组相比，转染Rab11siRNA组HeLa/SiHa细胞的侵袭能力明显下降，差异均有统计学意义(HeLa组t=16.841，P＜0.01；SiHa组t=18.244，P＜0.01，图2)。图1Rab11siRNA对于Rab11蛋白表达的影响Fig.1EffectofRab11siRNAonRab11expression图2Rab11siRNA对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭能力的影响Fig.2EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellinvasioncapacity阚岩岩，等.下调Rab11基因对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及机制探讨
《中国癌症杂志》2016年第26卷第3期2412.3Rab11siRNA转染后细胞迁移能力的检测细胞划痕损伤实验结果显示，Rab11siRNA组与si-negativecontrol组相比，HeLa/SiHa细胞的迁移能力明显降低(HeLa组24ht=3.909，P＜0.01，36ht=2.997，P＜0.05，SiHa组24ht=4.007，P＜0.01，36ht=2.838，P＜0.05，图3)。2.4Rab11siRNA干扰后Rac1、MMP2和MMP9蛋白的表达情况Westernblot检测结果显示，在21×103、72×103和92×103处有灰色条带显示，Rac1、MMP2和MMP9蛋白在Rab11siRNA组的表达量明显低于si-negativecontrol组(Rac1蛋白HeLa组t=8.794，P<0.01，SiHa组t=15.650，P<0.01；MMP2蛋白HeLa组t=5.634，P<0.01，SiHa组t=4.391，P<0.05；MMP9蛋白HeLa组t=3.430，P<0.05，SiHa组t=4.082，P<0.05，图4)。2.5转染Rab11siRNA对宫颈癌细胞骨架蛋白Rac1定位的影响Rab11siRNA组与si-negativecontrol组相比，分布在细胞周围的红色荧光强度降低，集中在细胞膜前端上的红色荧光明显减少(红色荧光为分布在细胞膜上的Rac1蛋白，蓝色荧光为细胞核DAPI染色，图5)。图3Rab11siRNA对宫颈癌HeLa/SiHa细胞迁移能力的影响Fig.3EffectofRab11siRNAoncervicalcancerHeLa/SiHacellmigrationcapacity图4Rab11siRNA对宫颈癌HeLa/SiHa细胞中Rac1、MMP2和MMP9蛋白表达的影响Fig.4EffectofRab11siRNAonRac1,MMP2andMMP9expressioninhumancervicalcancerHeLa/SiHacell
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ⅰb2期巨块型宫颈癌术前不同治疗方法的疗效观察[J]. 韩娜娜,邵文裕,刘开江,马焱. 中国癌症杂志. 2015(01)
本文编号：3529841
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