人脐带间充质干细胞外泌体对环磷酰胺诱导的颗粒细胞凋亡的实验研究

发布时间：2022-01-12 16:12

　　背景早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）是一种临床综合症,表现为女性在40岁之前出现月经过少或闭经至少4个月,连续两次促卵泡激素水平升高（FSH>25IU/L,两次间隔>4周）和雌二醇（E2）水平降低,严重者表现为生育能力降低甚至不孕。目前临床上常用的激素替代治疗（hormone replacement therapy,HRT）、褪黑素、脱氢表雄酮（DHEA）、饮食和运动等治疗手段都无法从根本上改善卵巢功能,提高患者的生育能力。因此,寻找新的治疗方法来改善患者的卵巢功能,提高其生育能力是目前临床上亟待解决的重要问题。间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）属于成体干细胞,具有多向分化潜能和自我更新能力,全球已有大量的动物实验及临床实验证明MSCs可以通过促进卵泡生成,恢复激素水平而修复受损的卵巢功能。然而,MSCs移植面临的致瘤性、免疫源性等问题成为其临床应用的阻碍。间充质干细胞外泌体（Exosomes derived from mesenchymal stem cell,MSC-EXO）... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HuMSCs细菌、

新乡医学院硕士学位论文20图3.流式细胞术检测脐带间充质干细胞表面标志物的表达2脐带间充质干细胞外泌体结构及特异性表面蛋白检测2.1脐带间充质干细胞外泌体的形态特征

新乡医学院硕士学位论文21外泌体来源于胞内体，为胞内体内陷形成的多泡体与细胞膜融合时释放到细胞外的纳米级微囊泡。超速离心法提取的脐带间充质干细胞外泌体，肉眼可以观察到HuMSC-EXOs沉淀在离心管底部，呈白色絮状物。TEM下可以观察到，外泌体直径在30-200nm之间，为圆形或椭圆形的膜性小囊泡，囊泡内有低密度电子沉积物存在，其周围可见双层的磷脂膜结构。如图4所示。图4TEM下外泌体的形态特征2.2WesternBlot检测外泌体表面蛋白的表达外泌体表面含有多种特异性蛋白质，例如，四跨膜蛋白质超家族成员CD81，肿瘤易感基因101(tumorsusceptibilitygene101，TSG101)，分子伴侣热休克蛋白70(heatshockprotein70，HSP70)，膜转运和融合蛋白flotillin,缺乏内质网相关蛋白Calnexin和溶酶体相关膜蛋白LAMP1。本实验结果如图5所示，WesternBlot结果显示，脐带间充质干细胞外泌体表面特异性表达HSP70、TSG101、CD81和flotillin-1，不表达Calnexin及LAMP1，说明我们提取的HuMSC-EXOs符合外泌体表面蛋白的表达。图5WesternBlot检测结果1.HuMSC-EXOs2.HuMSCs

【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌体的提取、鉴定和保存方法研究进展[J]. 蒲双双.  现代检验医学杂志. 2018(05)
[2]骨髓间充质干细胞外泌体对SD大鼠早衰卵巢的影响[J]. 周政,杜波,范雪,李楠,艾浩.  中国科技论文. 2018(12)
[3]外泌体分离方法研究进展[J]. 张玉星,张响,陈文杰,张丽果.  转化医学电子杂志. 2018(04)
[4]Exosomes as therapeutic drug carriers and delivery vehicles across biological membranes:current perspectives and future challenges[J]. Dinh Ha,Ningning Yang,Venkatareddy Nadithe.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2016(04)

博士论文
[1]染色体核型及转录因子SOHLH2、NR5A1在卵巢早衰发病机制中的作用研究[D]. 焦雪.山东大学 2014



本文编号：3585075