miR-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞生长的影响及调控机制

发布时间：2017-05-12 04:11

  本文关键词：miR-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞生长的影响及调控机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究采用随机对照原则研究瘦素和miR-182表达水平与卵巢癌发生和发展的相关性。选择在2013年11月1日至2014年1月31日期间来我院接受治疗的60例卵巢癌患者以及60例良性卵巢肿瘤患者为研究对象,应用手术疗法与化学治疗方法相结合的方式进行治疗,取患者卵巢癌组织、良性肿瘤组织进行检测,分析mIR-182以及瘦素mRNA和蛋白质表达水平。另外建立体外卵巢癌细胞模型SKOV3和A2780,分析miR-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。探讨miR-182对其潜在靶基因FOXO3的调控以及二者在调控卵巢癌进展中的作用,以期明确mi R-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞生长的作用机制及其临床价值。方法:1.临床收集卵巢癌组织标本60例,同时收集卵巢良性肿瘤标本60例。2.应用PCR方法检测组织标本中瘦素mRNA表达,应用Western blot法检测织标本中瘦素蛋白的表达;3.应用定量PCR方法检测组织标本中miR-182的表达;4.酶联免疫吸附法检测卵巢癌患者术前、术后血清和尿液中瘦素的含量;5.选用卵巢癌细胞株SKOV3和A2780细胞作为研究对象;6.应用不同浓度的瘦素(10、25、50、100和200ng/ml)作用卵巢癌细胞,mtt法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡;7.应用定量pcr方法检测卵巢癌细胞中mir-182的表达;同时应用westernblot法检测foxo3、bim和p27基因蛋白表达;8.应用rna干扰技术,下调卵巢癌细胞mir-182表达后;再应用不同浓度的瘦素(10、25、50、100和200ng/ml)作用癌细胞,mtt法检测细胞增殖,流式细胞技术法检测细胞凋亡;同时应用westernblot法检测foxo3、bim和p27基因蛋白表达。结果:1.不同临床期别(Ⅰ-Ⅳ)的卵巢癌组织中瘦素mrna相对表达量分别为(0.523±0.087,0.725±0.145,1.412±0.298,1.756±0.341),随临床期别增加,卵巢癌组织中瘦素mrna表达量增加,差异有统计学意义(f=26.07,p0.01);2.不同临床期别(Ⅰ-Ⅳ)的卵巢癌组织中瘦素蛋白相对表达量分别为(0.426±0.057,0.562±0.086,1.021±0.173,1.611±0.286),随临床期别增加,卵巢癌组织中瘦素蛋白表达量增加,差异有统计学意义(f=10.24,p=0.0013);3.不同临床期别(Ⅰ-Ⅳ)的卵巢癌组织中mir-182表达量分别为(0.426±0.105,0.984±0.251,1.589±0.351,2.045±0.568)随临床期别增加,卵巢癌组织中mir-182表达量增加,差异有统计学意义(f=13.756,p=0.002);4.卵巢癌患者术前血清中瘦素含量为(22.75±2.53)ng·ml-1,手术后血清中瘦素含量为(18.37±1.97)ng·ml-1,差异有统计学意义(p=0.003)。术前尿液中瘦素含量为(9.35±1.01)ng·ml-1,术后尿液中瘦素含量为(7.57±0.75)ng·ml-1,差异具有统计学意义(p=0.009);5.经相关分析,卵巢癌组织中mir-182表达量与瘦素mrna表达量和蛋白表达量分别呈正相关(r=0.57,p0.001;r=0.42,p=0.009);6.卵巢癌细胞经不同浓度瘦素作用后,细胞增殖率增加(f=12.56,p=0.045),凋亡减少(f=16.35,p=0.047),差异有统计学意义;同时卵巢癌细胞mir-182表达量增加,差异有统计学意义(f=17.88,p=0.012);foxo3、bim和p27基因蛋白表达增加,差异有统计学意义(p=0.022;p=0.008;p=0.012);7.应用RNA干扰,下调miR-182表达后,经不同浓度瘦素作用,卵巢癌细胞增殖率变化差异无统计学意义(SKOV3:F=3.98,P=0.59;A2780:F=5.69,P=0.78);卵巢癌细胞miR-182表达量变化差异无统计学意义(F=2.06,P=1.13;F=3.56,P=0.96);SKOV3细胞中FOXO3、Bim和p27基因蛋白相对表达量表达显著升高,分别为1.78±0.25、1.76±0.24、1.56±0.12,与对照组相比,差异有统计学意义(分别为P=0.023;P=0.042;P=0.05)。结论:1.瘦素可诱导卵巢癌细胞增殖,在此过程中,miR-182有介导作用;2.MiR-182可能是通过调控靶基因FOXO3、Bim和p27基因表达而发挥介导作用。
【关键词】：miR-182 瘦素 卵巢癌 细胞生长 RNA干扰
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-28
• 第一部分 miR-182和瘦素在卵巢癌患者组织中的表达及其与卵巢癌发展的相关性研究28-48
• 1 资料28-30
• 1.1 研究对象28
• 1.2 纳入排除标准28-29
• 1.3 观察指标29
• 1.4 实验试剂29-30
• 1.5 实验仪器30
• 2 方法30-38
• 2.1 RT-PCR检测两组患者组织中瘦素mRNA表达30-32
• 2.2 蛋白质印迹法（Western Blot）检测两组患者组织中瘦素蛋白水平32-35
• 2.3 RT-qPCR 检测卵巢癌患者组织中 miR-182 表达35-37
• 2.4 酶联免疫吸附法（ELISA）检查患者血清和尿液中的瘦素水平37-38
• 2.5 统计学方法38
• 3 结果38-45
• 3.1 瘦素mRNA在两组患者组织中的表达38-40
• 3.2 瘦素蛋白在两组患者组织中的表达40-41
• 3.3 miR-182 在卵巢癌组织中的表达41-43
• 3.4 酶联免疫吸附法检测卵巢癌患者血清及尿液中瘦素含量43-44
• 3.5 卵巢癌患者组织中miR-182与瘦素mRNA和蛋白表达的相关性分析44-45
• 4 讨论45-48
• 第二部分 miR-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞生长的调控作用48-64
• 1 材料48-50
• 1.1 主要试剂48-49
• 1.2 主要仪器49-50
• 2 方法50-54
• 2.1 卵巢癌细胞培养50-51
• 2.2 MTT法检测卵巢癌细胞增殖51
• 2.3 流式细胞术检测卵巢癌细胞凋亡变化情况51-52
• 2.4 miR-182反义序列的瞬时转染52
• 2.5 蛋白质印迹法52-53
• 2.6 统计学方法53-54
• 3 结果54-61
• 3.1 不同浓度瘦素作用后卵巢癌细胞增殖和凋亡率的变化54-55
• 3.2 不同浓度瘦素作用对卵巢癌细胞中mi R-182表达的影响55-56
• 3.3 瘦素对卵巢癌细胞中FOXO3及其下游基因p27/Bim的影响56-57
• 3.4 miR-182 antago-miR对瘦素诱导的卵巢癌细胞中miR-182表达的抑制作用57-59
• 3.5 miR-182 antago-miR对瘦素诱导的卵巢癌细胞增殖的作用59
• 3.6 miR-182 antago-miR对瘦素诱导的FOXO3及其下游靶基因p27和Bim表达的影响59-61
• 4 讨论61-64
• 小结64-65
• 参考文献65-76
• 个人简历及研究成果76-77
• 致谢77

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 任玉霞;吴京芳;;卵巢癌患者血清可溶性间皮素相关蛋白的检测及其意义[J];中国实验诊断学;2014年01期

2 郭玉琪;赵冠男;郝玉娟;李晓倩;田捧;张俊清;郭欢欢;张展;;瘦素在卵巢癌中的表达及临床意义[J];中国妇幼保健;2014年13期

  本文关键词：miR-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞生长的影响及调控机制，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：358745