miR-34a-5p靶向AKT1基因对子宫内膜异位症子宫内膜基质细胞侵袭及自噬的调控
发布时间：2022-01-16 23:57
目的研究微小RNA-34a-5p （miR-34a-5p）靶向AKT1基因对子宫内膜异位症（EM）子宫内膜基质细胞（ESCs）侵袭及自噬的调控作用。方法原代分离、培养EM患者ESCs,构建negative control RNA （NC）及mimic细胞模型,采用双荧光肾素酶报告系统验证miR-34a-5p与AKT1基因存在结合位点,RT-PCR及Western blotting检测并验证2组细胞miR-34a-5p和AKT1基因的表达及调控关系;检测miR-34a-5p对ESCs的增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果 EM患者ESCs中miR-34a-5p较非EM患者明显降低,而AKT1基因的表达明显升高,且两者变化呈负相关;miR-34a-5p通过特异性结合AKT1基因的3’UTR区对AKT1基因的表达进行调控;转染miR-34a-5p mimic可使ESCs中miR-34a-5p表达升高,AKT1基因表达降低,同时使ESCs的增殖、迁移及侵袭能力增强,而凋亡及自噬能力下降。结论 miR-34a-5p靶向AKT1基因促进ESCs的增殖、迁移及侵袭能力,降低其凋亡及自噬能力,可能在EM...
【文章来源】：中国医科大学学报. 2020,49(09)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
ESCs和EECs免疫荧光双染色×200
将野生型及突变型AKT1基因3’UTR荧光素酶报告基因质粒与NC及miR-34a-5p mimic分别共转染ESCs，统计4组相对荧光素酶活性的差异。结果显示，转染野生型AKT1基因3’UTR荧光素酶报告基因质粒的ESCs中，转染miR-34a-5p mimic组较NC组相对荧光素酶活性显著降低（P<0.01），而转染突变型AKT1基因3’UTR荧光素酶报告基因质粒ESCs中，NC组及miR-34a-5p mimic组相对荧光素酶活性无统计学差异（P>0.05）。说明ESCs中miR-34a-5p与AKT1基因存在一定的结合区域，miR-34a-5p对AKT1基因的表达具有调控作用。见图2。2.5 miR-34a-5p过表达抑制ESCs增殖
流式细胞仪检测结果显示，NC组ESCs凋亡率（8.82%±3.5%）较mi R-34a-5p mimic组（17.42%±2.8%）显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。qRT-PCR结果显示，NC组LC3基因表达水平明显低于mi R-34a-5p mimic组，差异有统计学意义（P<0.05）。见图5。图3 miR-34a-5p过表达抑制ESCs迁移能力×200
本文编号：3593650
【文章来源】：中国医科大学学报. 2020,49(09)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
ESCs和EECs免疫荧光双染色×200
将野生型及突变型AKT1基因3’UTR荧光素酶报告基因质粒与NC及miR-34a-5p mimic分别共转染ESCs，统计4组相对荧光素酶活性的差异。结果显示，转染野生型AKT1基因3’UTR荧光素酶报告基因质粒的ESCs中，转染miR-34a-5p mimic组较NC组相对荧光素酶活性显著降低（P<0.01），而转染突变型AKT1基因3’UTR荧光素酶报告基因质粒ESCs中，NC组及miR-34a-5p mimic组相对荧光素酶活性无统计学差异（P>0.05）。说明ESCs中miR-34a-5p与AKT1基因存在一定的结合区域，miR-34a-5p对AKT1基因的表达具有调控作用。见图2。2.5 miR-34a-5p过表达抑制ESCs增殖
流式细胞仪检测结果显示，NC组ESCs凋亡率（8.82%±3.5%）较mi R-34a-5p mimic组（17.42%±2.8%）显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。qRT-PCR结果显示，NC组LC3基因表达水平明显低于mi R-34a-5p mimic组，差异有统计学意义（P<0.05）。见图5。图3 miR-34a-5p过表达抑制ESCs迁移能力×200
本文编号：3593650
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