6-姜烯酚对人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞生长和促炎因子表达的抑制作用

发布时间：2017-05-15 14:12

  本文关键词：6-姜烯酚对人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞生长和促炎因子表达的抑制作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本实验通过研究6-姜烯酚对MyD88+人卵巢癌细胞SKOV-3和MyD88-人卵巢癌细胞A2780分泌的细胞因子(IL-6、IL-8、VEGF)及其增殖、凋亡、周期的影响和6-姜烯酚对紫杉醇诱导的MyD88+人卵巢癌细胞SKOV-3和MyD88-人卵巢癌细胞A2780细胞因子分泌及细胞生长的影响,旨在探讨6-姜烯酚对卵巢癌细胞促炎因子表达及细胞生长的抑制作用。方法：1.使用计算机软件模拟6-姜烯酚与髓样分化蛋白-2(MD-2)的分子对接情况。2.MTT法筛选6-姜烯酚的浓度区间,测定6-姜烯酚、紫杉醇及二者联合用药诱导人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞后细胞的存活率。3. ELISA法检测6-姜烯酚、紫杉醇及二者联合用药诱导人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞分泌IL-6、IL-8和VEGF的浓度。4.流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法检测不同浓度6-姜烯酚、紫杉醇诱导人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞的周期分布变化及固定浓度6-姜烯酚、紫杉醇诱导人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞不同时间的细胞凋亡率。结果：1.通过计算机软件将6-姜烯酚和MD-2晶体结构相互作用,6-姜烯酚可以和MD-2蛋白相结合。2. SKOV-3细胞株能自分泌IL-6、IL-8、VEGF, A2780细胞能自分泌IL-8、VEGF,几乎不分泌IL-6,6-姜烯酚可以减少SKOV-3细胞分泌的IL-6、IL-8、VEGF(P0.05),而对A2780细胞分泌的IL-6、IL-8无影响(P0.05),但可以抑制VEGF的分泌(P0.05)。紫杉醇可以诱导SKOV-3细胞分泌IL-6、IL-8、VEGF,而对A2780细胞分泌的IL-6、IL-8、VEGF无明显影响。6-姜烯酚可以减少紫杉醇诱导的SKOV-3细胞分泌IL-6、IL-8、 VEGF,(P0.05),且可以减少紫杉醇诱导的A2780细胞分泌VEGF(P0.05),而对A2780细胞分泌的IL-6、IL-8无明显影响(P0.05)。3.6-姜烯酚、紫杉醇均可以时间依赖方式诱导人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞凋亡(P0.05)。6-姜烯酚对人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞增殖周期分布变化的影响均不显著(P0.05),紫杉醇诱导卵巢癌SKOV-3和A2780细胞后,细胞周期阻滞在G2/M期(P0.05)。4.6姜烯酚和紫杉醇均以剂量依赖方式抑制人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞存活,6-姜烯酚的ICso分别为(6.48±0.4536)μmol/L和(6.27±0.3762)μmol/L;其IC50浓度相近,无明显细胞选择性,但对两种细胞的生长抑制作用较显著。紫杉醇的IC50分别为(0.034±0.0042)μmol/L和(0.028±0.0035)μmol/L。6-姜烯酚(IC10浓度)无明显增加紫杉醇对人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞的生长抑制作用(P0.05)。结论：1.6-姜烯酚可能通过抑制Toll样受体-4与MD-2结合,阻断LPS或紫杉醇诱导的促炎因子的分泌,从而抑制人卵巢癌细胞周围炎症反应的发生。2.6-姜烯酚可通过诱导人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞凋亡而抑制其增殖。
【关键词】：6-姜烯酚 卵巢癌 紫杉醇 血管内皮生长因子(VEGF) 白介素-8 白介素-6
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-7
• 英文缩写词对照表7-11
• 引言11-15
• 2.1 材料15-19
• 2.1.0 实验细胞15
• 2.1.1 实验试剂15-16
• 2.1.1.1 主要药物15
• 2.1.1.2 主要试剂15-16
• 2.1.2 主要实验仪器与设备16-17
• 2.1.3 主要实验耗材17
• 2.1.4 主要溶液配制17-19
• 2.1.4.1 RPMI-1640培养基的配制17-18
• 2.1.4.2 磷酸盐缓冲液(PBS)18
• 2.1.4.3 0.25%的胰蛋白酶消化液18
• 2.1.4.4 MTT液18
• 2.1.4.5 5%的血清终止液18
• 2.1.4.6 细胞冻存液18-19
• 2.2 方法及技术路线19-33
• 2.2.1 实验流程图19-22
• 2.2.1.1 卵巢癌细胞存活率及其IC_(50)的测定19
• 2.2.1.2 流式细胞仪检测细胞周期19-20
• 2.2.1.3 流式细胞仪检测细胞凋亡20
• 2.2.1.4 ELISA法检测IL-6、IL-8和VEGF20-22
• 2.2.2 细胞复苏、培养、传代和接种22-23
• 2.2.2.1 细胞复苏及培养22
• 2.2.2.2 细胞传代22
• 2.2.2.3 细胞接种22-23
• 2.2.2.4 细胞冻存23
• 2.2.3 药物配制23
• 2.2.3.1 6-姜烯酚23
• 2.2.3.2 紫杉醇23
• 2.2.4 计算机模拟分子对接实验23-24
• 2.2.5 ELISA法测定卵巢癌细胞分泌IL-6、IL-8和VEGF的浓度24-25
• 2.2.5.1 固定浓度的6-姜烯酚、紫杉醇诱导SKOV-3及A2780细胞48小时后IL-8、IL-6、VEGF的测定24-25
• 2.2.5.2 6-姜烯酚联合紫杉醇诱导SKOV-3及A2780细胞48小时后IL-8、IL-6、VEGF的测定25
• 2.2.6 流式细胞术25-30
• 2.2.6.1 流式细胞仪检测细胞周期26-28
• 2.2.6.1.1 6-姜烯酚、紫杉醇IC_(10)浓度作用于A2780和SKOV-3细胞24h后细胞周期的变化26-27
• 2.2.6.1.2 6-姜烯酚、紫杉醇的IC_(50)浓度作用于A2780和SKOV-3细胞24 h后细胞周期的变化27-28
• 2.2.6.2 流式细胞仪检测细胞凋亡28-30
• 2.2.6.2.1 固定浓度的6-姜烯酚、紫杉醇作用于A2780和SKOV-3细胞15h后细胞凋亡的变化28-29
• 2.2.6.2.2 固定浓度的6-姜烯酚、紫杉醇作用于A2780和SKOV-3细胞30 h后细胞凋亡的变化29-30
• 2.2.7 MTT法测卵巢癌细胞的生长状况及药物对其生长抑制作用30-33
• 2.2.7.1 6-姜烯酚抑制人卵巢癌细胞生长的浓度区间筛选30-31
• 2.2.7.2 不同浓度6-姜烯酚或紫杉醇对A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用31-32
• 2.2.7.3 6-姜烯酚联合不同浓度紫杉醇对A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用32-33
• 2.2.8 统计学方法33
• 2.3 结果33-50
• 2.3.1 6-姜烯酚与TLR4表面的髓样分化蛋白-2(MD-2聚体)结合的情况33-34
• 2.3.2 6-姜烯酚、紫杉醇对人卵巢癌细胞分泌的细胞因子的影响34-37
• 2.3.2.1 6-姜烯酚、紫杉醇单独及联合用药诱导人卵巢癌SKOV-3细胞和A2780细胞48h后IL-8的测定34-35
• 2.3.2.2 6-姜烯酚、紫杉醇单独及联合用药诱导人卵巢癌SKOV-3细胞和A2780细胞48h后VEGF的测定35-36
• 2.3.2.3 6-姜烯酚、紫杉醇单独及联合用药诱导SKOV-3细胞和A2780细胞48小时后IL-6测定36-37
• 2.3.3 6-姜烯酚、紫杉醇对人卵巢癌细胞周期的影响37-42
• 2.3.3.1 6-姜烯酚对人卵巢癌SKOV-3细胞周期的影响37-38
• 2.3.3.2 紫杉醇对人卵巢癌SKOV-3细胞周期的影响38
• 2.3.3.3 6-姜烯酚对人卵巢癌A2780细胞周期的影响38-39
• 2.3.3.4 紫杉醇对人卵巢癌A2780细胞周期的影响39-40
• 2.3.3.5 各实验组不同浓度药物诱导人卵巢癌SKOV-3细胞和A2780细胞24 小时后细胞周期分布的变化40-42
• 2.3.4 6-姜烯酚、紫杉醇对人卵巢癌细胞凋亡的影响42-45
• 2.3.4.1 6-姜烯酚对人卵巢癌A2780细胞凋亡的影响42-43
• 2.3.4.2 6-姜烯酚诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的作用43
• 2.3.4.3 紫杉醇诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用43-44
• 2.3.4.4 紫杉醇诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的作用44-45
• 2.3.5 6-姜烯酚、紫杉醇对人卵巢癌细胞的生长抑制作用45-50
• 2.3.5.1 6-姜烯酚抑制人卵巢癌细胞生长的浓度区间筛选45
• 2.3.5.2 6-姜烯酚对人卵巢癌SKOV-3细胞的生长抑制作用45-46
• 2.3.5.3 紫杉醇对人卵巢癌SKOV-3细胞的生长抑制作用46-47
• 2.3.5.4 6-姜烯酚联合紫杉醇对人卵巢癌SKOV-3细胞的生长抑制作用47
• 2.3.5.5 各实验组药物诱导人卵巢癌SKOV-3细胞72小时后IC_(50)数值比较47-48
• 2.3.5.6 6-姜烯酚对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用48
• 2.3.5.7 紫杉醇对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用48-49
• 2.3.5.8 6-姜烯酚联合紫杉醇对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用49
• 2.3.5.9 各实验组药物诱导人卵巢癌A2780细胞72小时后IC_(50)数值比较49-50
• 2.4 讨论50-54
• 2.5 结论54
• 2.6 问题与展望54-56
• 致谢56-57
• 参考文献57-67
• 综述67-74
• 参考文献69-74
• 附件74-75

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